Recovery of equine oocytes by scraping of the follicular wall with different specifications of needles and morphological analysis of cumulus oophorus

In follicular aspiration, physical aspects are of high significance for the technique to succeed, such as vacuum pressure, caliber of the needle and the way the follicular wall curettage is performed. The aim of this study was to investigate the recovery rate of equine oocytes aspirated by scraping of the follicular wall, testing different calibers of disposable needles, as well as the morphological evaluation of the cumulus oophorus complexes (COCs). Mares ovaries (n=447) obtained at a local slaughterhouse were transported to the laboratory in a thermal container (20 °C) and had the tunica albuginea and connective tissues dissected. The aspirated follicles had 10 to 25 mm in diameter, and 30x8 (21G 1 ¼) or 40x12 (18G 1 ½) needles were used for the aspiration, forming group A (G-A) and group B (G-B), respectively. In G-A and G-B, 480 and 548 follicles were aspirated, respectively. Under the stereomicroscope, the oocytes were evaluated according to the quality of the ooplasm and characteristics of the cumulus cells (grade I, II, III and denuded). The statistical analysis was performed using the Student’s t-test, logistic regression and test of proportions, and differences were considered significant when P<0.05. There was no difference between recovery rates of groups G-A (66.5%; 330/496) and G-B (65.5%; 359/548). In the G-A group, grade II oocytes were related to higher recovery rates (46.9%; 145/330) than grade I (23.6%; 72/330), grade III (20.6%; 59/330) and denuded oocytes (8.5%; 24/330; P<0.05). However, in G-B, there was no statistical difference regarding the quality of the recovered oocytes: grade I (23.4%; 77/359), grade II (43.2%; 145/359), grade III (22.5%; 73/359) and denuded (11.1%; 32/359). The 30x8 (21G 1 ¼) needle provided a higher proportion of grades I and II oocytes than the 40x12 (18G 1 ½) needle, with 72.4% (239/330) and 65% (233/359; P<0.05), respectively. Both calibers of needles tested in this study provide efficient oocyte recovery rates. Aspiration with 30x8 (21G 1 ¼) needles resulted in a higher proportion of morphologically good equine oocytes for use in reproductive biotechnologies. Na obtenção de oócitos para a espécie equina, aspectos físicos são de alta significância para o sucesso da técnica, como a pressão de vácuo e o calibre de agulha utilizado, além da forma como é realizada a raspagem da parede folicular. O objetivo deste estudo foi investigar o índice de recuperação de oócitos equinos aspirados pela técnica de raspagem da parede folicular, testando calibres distintos de agulhas descartáveis, assim como avaliação morfológica dos complexos cumulus oophorus (CCOs). Foram utilizados ovários de éguas (n=447), obtidos em abatedouro local, transportados ao laboratório em recipiente térmico (20 ºC) e submetidos à dissecação da túnica albugínea e tecidos conectores. Os folículos aspirados obtinham diâmetro entre 10 mm a 25 mm, e para tanto utilizou-se a agulha 30x8 (21G 1 ¼) ou 40x12 (18G 1 ½), formando respectivamente, o grupo A (G-A) e grupo B (G-B). No G-A e G-B aspiraram-se 480 e 548 foliculos, respectivamente. Sob lupa estéreo-microscópica avaliou-se os oócitos quanto à qualidade do ooplasma e características das células do cumulus oophorus (grau I, II, III e desnudo). Para análise estatística utilizou-se teste t Student, regressão logistica e teste de proporções, e as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. A taxa de recuperação entre G-A e G-B não apresentou diferença; 66,5% (330/496) e 65,5% (359/548), respectivamente. Houve diferença quanto à qualidade dos oócitos no G-A, no qual os oócitos de grau II obtiveram melhor taxa (46,9%; 145/330; P<0,05) frente ao grau I (23,6%; 72/330), grau III (20,6%; 59/330) e desnudo (8,5%; 24/330). Entretanto, no G-B não houve diferença estatística quanto aos graus de qualidade do CCOs recuperados, grau I (23,4%; 77/359), grau II (43,2%; 145/359), grau III (22,5%; 73/359) e desnudo (11,1%; 32/359). A agulha 30x8 (21G 1 ¼) porporcionou maior proporção de oócitos de grau I e II aspirados do que a agulha 40x12 (18G 1 ½), com 72,4% (239/330) e 65% (233/359; P<0,05), respectivamente. Ambos os calibres de agulhas testados proporcionam taxas eficientes de recuperação de oócitos. A aspiração com agulha 30x8 (21G 1 ¼) apresentou maior proporção de oócitos equinos de melhor qualidade morfológica para aplicação em biotécnicas reprodutivas