Open AccessEste artigo teve por objetivo determinar a soroprevalência da infecção por Toxoplasma gondii através de análise sorológica e molecular em cães de Cuiabá, município do cerrado brasileiro, associando com os fatores de risco envolvidos na cadeia de transmissão. Estudo transversal foi conduzido com cães de áreas rurais e urbanas de Cuiabá (Mato Grosso), entre fevereiro de 2010 a janeiro de 2011, através da pesquisa de anticorpos por imunofluorescência indireta e DNA de Toxoplasma gondii. Foram avaliados no estudo um total de 269 cães por IFI, considerando reagente cães com título ? 16 e por PCR de capa leucocitária. Dos 269 cães pesquisados, 48,7% apresentaram anticorpos anti-Toxoplasma gondii pela IFI e 15,6% DNA do parasito. Os bairros localizados em ambiente rural apresentaram uma soroprevalência de 62,4% e os urbanos de 40,4%, dados estes estatisticamente significativos (p= 0,0007). Os títulos mais frequentemente observados foram de 256 em 51 (39%) cães, seguido por 1024 em 37 (28,2%) cães avaliados. A infecção pelo agente esteve associada a raça, idade, acesso à rua e ao ambiente em que o animal vivia (p<0,05). Os resultados sorológicos e moleculares permitiram inferir que a infecção por T. gondii encontra-se ativa na população canina nas regiões rurais e urbanas do município de Cuiabá, com risco maior em cães residentes em áreas rurais.