Open AccessCROMATOGRAFIA DE AFINIDADE COM ÍON CU2+: ELIMINAÇÃO DE FALSO-POSITIVOS NA DETECÇÃO DE ENTEROTOXINA ESTAFILOCÓCICA
Author(s) -
Claudia Valéria Nervino,
Claudia Rosa Moreno,
Marcia Kamogae,
Tereza Cristina Rocha Moreira de Oliveira,
Elisa Yoko Hirooka
Publication year - 2001
Publication title -
boletim do centro de pesquisa e processamento de alimentos
Language(s) - English
Resource type - Journals
SCImago Journal Rank - 0.124
H-Index - 8
eISSN - 1983-9774
pISSN - 0102-0323
DOI - 10.5380/cep.v19i2.1234
Subject(s) - chemistry , enterotoxin , chromatography , sepharose , biochemistry , escherichia coli , gene , enzyme
Avaliou-se a aplicação da cromatografia de afinidade com íon Cu2+ para minimizar a interferência de componentes alimentares na detecção de enterotoxinas estafilocócicas mediante imunoensaio, baseado em aglutinação de látex (RPLA). Os ensaios preliminares com chantilly contaminado com 25 ng de enterotoxina estafilocócica A (EEA) indicaram que a cromatografia de afinidade com íon Cu2+ eliminou interferentes que causavam reação falso-positiva em RPLA. A eficiência do procedimento de limpeza foi testada em 15 extratos alimentares (de surtos e/ou com alta contagem estafilocócica), compreendendo vários tipos de alimentos comumente consumidos no Brasil. Onze extratos alimentares apresentaram um pico único de eluição com perfis semelhantes e as frações testadas por RPLA demonstraram EEA (4 alimentos), EEB (1), EEA + EEB (3), EEA + EED (2) e EEA + EEB + EED (1). Os problemas de reações inespecíficas com kit RPLA em 2 extratos de bolos recheados foram eliminados, indicando que a adoção desta operação evitaria a reação falso-positiva. CU2+ AFFINITY CHROMATOGRAPHY: ELIMINATION OF FALSE-POSITIVE IN THE DETECTION OF STAPHYLOCOCCAL ENTEROTOXIN Abstract The application of Cu2+ chelate Sepharose affinity chromatography was evaluated to reduce the interference of food constituents in the detection of staphylococcal enterotoxin with reversed passive latex agglutination immunoassay (RPLA). The preliminary assay using chantilly contaminated with 25 nanograms of staphylococcal enterotoxin A (SEA) indicated that Cu2+ ion affinity chromatography eliminated the food matrix constituents responsible for false-positive reaction of RPLA. The efficiency of this clean-up procedure was tested in 15 food extracts (from outbreaks and/or with high staphylococcal count), comprising various types of food commonly consumed in Brazil. Eleven food extracts showed only one elution peak with similar profile and the fractions assayed by RPLA demonstrated SEA (4 food), SEB (1), SEA + SEB (3), SEA + SED (2) e SEA + SEB + SED (1). The problems of nonspecific reactions with the RPLA kit in 2 cake extracts were eliminated, indicating that the adoption of this operation avoids the falsepositive reaction.