FELINE ATRIAL NATRIURETIC PEPTIDE (ANP) HAS A SINGLE COPY GENE

O peptídeo natriurético atrial felino (PNA) é um hormônio sintetizado pelo miocárdio cardíaco atrial que, uma vez liberado na circulação, produz diurese, natriurese e vasodilatação periférica. Nós recentemente isolamos, sequenciamos e estabelemos a expressão cardíaca normal do PNA felino. No presente estudo, nós apresentamos o número de cópias gênicas do PNA em gatos. Foram extraídas amostras de DNA genômico do sangue periférico humano e felino, as quais foram purificadas e digeridas com as enzimas de restrição EcoRI, BamHI e HindIII, com posterior realização da técnica de Southern Blots. Primers para PCR, confeccionados para regiões de alta conservatividade entre espécies, foram utilizados para amplificação, clonagem e sequenciamento de um produto de 900 pares de bases, posteriormente utilizado como sonda de DNA. O gene do PNA felino possui uma única cópia gênica, a exemplo do PNA humano. Devido a sua similaridade, sondas de DNA felino puderam ser utilizadas para a hibridização de DNA genômico tanto do gato como do homem. Abstract Atrial natriuretic peptide (ANP) is a hormone normally synthesized by the cardiac atrial myocardium that once released, produces diuresis, natriuresis and peripheral vasodilation. We have recently isolated, sequenced and assessed the normal cardiac expression of feline ANP. In this study, we report on the number of copies of the feline ANP gene, which could have an effect on future molecular biology studies of ANP gene expression in cat models of cardiovascular disease. Cat and human genomic DNA (gDNA) were extracted for Southern blotting from blood. The purified DNA was digested with the restriction enzymes EcoRI, BamHI and HindIII followed by agarose gel electrophoresis and blotting onto nytran membranes. A feline ANP cDNA probe of approximately 900 base pairs was used for hybridization of the membranes. The results of Southern blotting showed that both the feline and human genomes contain a single copy of the ANP gene.