Open AccessIsolamento e caracterização parcial de sequências homólogas a genes ribossomais (rDNA) em Blastocladiella emersonii
Author(s) -
Luciano Seraphim Gasques,
Maria Aparecida Fernandez,
Luiz Carlos Corrêa
Publication year - 2003
Publication title -
acta scientiarum. biological sciences
Language(s) - English
Resource type - Journals
SCImago Journal Rank - 0.16
H-Index - 23
eISSN - 1807-863X
pISSN - 1679-9283
DOI - 10.4025/actascibiolsci.v25i2.2037
Subject(s) - subcloning , biology , gene , genetics , ribosomal rna , southern blot , ribosomal dna , restriction enzyme , restriction map , origin of replication , microbiology and biotechnology , plasmid , phylogenetics
A definição e a caracterização de regiões de origens de replicação nos eucariotos superiores são ainda controversas. A iniciação da replicação é sítio-específica em alguns sistemas e, em outros, parece estar contida em regiões extensas. Regiões rDNA são modelos atrativos para o estudo de origens de replicação pela sua organização in tandem, reduzindo a área de estudo para o espaço restrito que codifica uma unidade de transcrição. Neste trabalho nós isolamos e caracterizamos parcialmente um clone que contém uma sequência ribossomal do fungo aquático Blastocladiella emersonii, Be97M20. Southern blots mostraram diversos sítios para enzimas de restrição Eco RI, HindIII e SalI. Northern blot de RNA total hibridado contra uma sonda feita com Be97M20 confirmou a sua homologia com o gene ribossomal 18S. A caracterização detalhada, incluindo o mapeamento de restrição completo, subclonagem, sequenciamento e análise em géis bidimensionais proverão informações adicionais importantes sobre a estrutura e dinâmica desta região The definition and the characterization of replication origins regions in higher eukaryotes are still controversial. The initiation of the replication is site-specific in some systems but seems to occur in large regions in others. Because of its in tandem organization, reducing the area to the restricted space that codifies an unit of transcription, rDNA regions are attractive models to study replication origins. In this work we isolated and started to characterize a clone that contains a ribosomal sequence from the aquatic fungus B. emersonii, Be97M20. Southern blots showed several sites for the restrition enzymes Eco RI, HindIII and SalI. A northern blot of total RNA, hybridized against a probe made from Be97M20, confirmed its homology with the ribosomal 18S gene. The detailed characterization, including complete restriction map, subcloning, sequence and analysis on bidimensional gels will provide important information about the structure and dynamics of this regio