Open AccessOptymalizacja metod detekcji mutacji w genie Nud indukowanej przez technologię CRISPR/Cas9 w jęczmieniu zwyczajnym (Hordeum vulgare L.)
Author(s) -
Mateusz Przyborowski,
Sebastian Gasparis,
Wacław Orczyk,
AndolskaOrczyk
Publication year - 2019
Publication title -
biuletyn instytutu hodowli i aklimatyzacji roślin
Language(s) - Polish
Resource type - Journals
eISSN - 2657-8913
pISSN - 0373-7837
DOI - 10.37317/biul-2019-0104
Subject(s) - crispr , biology , genetics , gene
Celem pracy był wybór optymalnej metody detekcji mutacji w genie Nud indukowanej z wykorzystaniem technologii CRISPR/Cas9 w jęczmieniu zwyczajnym. Testowano cztery powszechnie wykorzystywane techniki genotypowania: polimorfizm długości fragmentów restrykcyjnych (RFLP), trawienie enzymatyczne przy użyciu endonukleazy I z bakteriofaga T7, wysokorozdzielczą krzywą topnienia produktu reakcji łańcuchowej polimerazy (HRM-PCR) oraz sondy molekularne. W toku prowadzonych prac stwierdzono, że najkorzystniejszym sposobem wykrywania mutacji indukowanej techniką CRISPR/Cas9 jest metoda oparta o sondy molekularne. Daje ona jednoznaczne i powtarzalne wyniki ale jednocześnie wymaga użycia zawansowanej aparatury.