Radioligand binding assay for the simultaneous determination of β1- and β2-adrenergic receptors in human blood cells

Во многих тканях и клетках человека присутствуют как β1-, так и β2-адренорецепторы, информация о содержании и динамике поведения кото-рых часто является клинически значимой. В настоящем исследовании предложена методика раздельного определения обоих типов адреноре-цепторов на основе радиолигандного анализа с использованием 125I-йодоцианопиндолола, включающая проведение трех измерений: 1) безлигандов-конкурентов; 2) в присутствии селективного лиганда ICI 118,551 (0,25 мкМ); 3) в присутствии двух селективных лигандов ICI 118,551и CGP 20712 (по 0,25 мкМ каждого). Методика протестирована на модельной системе из двух трансгенных линий клеток с экспрессией реком-бинантных β1- и β2-адренорецепторов. При соотношении количества β1-адренорецепторов к β2-адренорецепторам 1:10 погрешность измере-ния составляет около 15%. Анализ 9 клеточных линий, представляющих различные типы клеток крови, показал наличие β2-адренорецепторовв клетках Daudi, Raji, Dami, K-562, HL-60, U-937 и THP-1 и их отсутствие в Т-лимфоцитарных клетках Jurkat и MOLT-4. β1-адренорецепторыдостоверно зарегистрированы лишь в клетках THP-1 моноцитарного происхождения. В остальных клетках, за исключением линии Dami, ихколичество оказалось ниже порога детекции, оцениваемого на уровне 250 молекул на клетку. Измерения, выполненные на мононуклеарныхклетках периферической крови здоровых доноров, продемонстрировали присутствие β2-адренорецепторов в диапазоне от 1000 до 2500 моле-кул на клетку, тогда как содержание β1-адренорецепторов во всех случаях находилось на грани или за гранью порога детекции. По-видимому,изучение β1-адренорецепторов в дальнейшем следует проводить на отдельных фракциях клеток крови, в частности на фракции моноцитов β1- and β2-adrenergic receptors are presented in various human tissues and cells, while the information of their content and dynamic behavior is oftenly consideredas clinically significant. In this study, a method for the separate determination of both types of adrenoceptors based on radioligand binding analysis using 125Iiodocyanopindolol is proposed, comprising three measurements: 1) without competing ligands; 2) in the presence of selective ligand ICI 118,551 (0.25 μM); 3)in the presence of two selective ligands ICI 118,551 and CGP 20712 (0.25 μM each). The technique was tested on a model system of two transgenic cell lineswith the expression of recombinant β1- and β2-adrenergic receptors. If the ratio of the number of β1-adrenergic receptors to β2-adrenergic receptors is 1:10, themeasurement error is about 15%. Analysis of 9 cell lines representing different types of blood cells showed the presence of β2-adrenergic receptors in Daudi, Raji,Dami, K-562, HL-60, U-937 and THP-1 cells and their absence in Jurkat and MOLT-4 cells. β1-adrenergic receptors are reliably registered only in THP-1 cells ofmonocytic origin. In the remaining cell lines, with the exception of Dami, the number of β1-adrenergic receptors was found below the detection limit, estimatedas 250 molecules per cell. Measurements performed on the peripheral blood mononuclear cells of healthy donors showed the presence of β2-adrenergic receptorsin the range from 1000 to 2500 molecules per cell, while the content of β1-adrenergic receptors in all cases appeared to be on the border or beyond the detectionlimit. Apparently, further study of β1-adrenergic receptors should be performed on the blood cells isolated fractions, on monocytes in particular