Разработка тест системы оценки ферментативного звена метаболизма 5-фторурацила

Резюме. Главным лимитирующим фактором, определяющим концентрации активных метаболитов 5-фторурацила (5-ФУ), является активность тимидинфосфорилазы (ТФ), которая реализует первый этап его активации, и дигидропиримидиндегидрогеназы (ДПД), которая обеспечивает его деградацию. Цель. Разработка и апробация малоинвазивной тест-системы для прогнозирования индивидуального ответа на химиотерапию 5-фторурацилом. Материалы и методы. Апробация метода была проведена на стандартных растворах, биоптатах опухолевых узлов и смежных с ними не трансформированных тканях, взятых у больных с аденокарциномой молочной железы. Активность ферментов, отвечающих за метаболизм 5-ФУ, определяли по изменению концентрации продуктов реакции: 5-фторуридину и тимину для ТФ, 5-фтор-2-дезоксиуридина для ДПД на методом ВЭЖХ на хроматографе Кonikrom (Испания) c флюометрическим и ультрафиолетовым детектором с колонкой YMC Hydrosphere C18 5 мкм 250 x 0,46 в обратнофазовом режиме. Заключение. Методика комплексной оценки ключевых ферментов фармакодинамики 5-ФУ обеспечивает удовлетворительное детектирование и разделение, как субстратов, так и продуктов метаболизма 5-ФУ. В среднем коэффициент разделения пиков составил не менее 2.  Показан трансферазный механизм переноса тимидинфосфорилазой рибозильного остатка с тимидина на 5-ФУ с образованием активного действующего вещества – 5-фторуридина и тимина. Также отмечена неоднородность в ферментативном профиле образцов с сохранением однонаправленности степени выраженности экспрессии исследуемых ферментов.