PROTOCOLOS DE PREPARACIÓN DE ESPORAS DE MICORRIZA ARBUSCULAR PARA SU OBSERVACIÓN EN MICROSCOPIO ELECTRÓNICO Y DE FLUORESCENCIA

El objetivo del presente estudio fue desarrollar protocolos base de preparación de esporas de micorriza arbuscular (MA) para su observación en el microscopio electrónico de barrido (MEB) y de tinción vital basada en la reacción enzimática con Diacetato de Fluoresceína (FDA). La microscopía electrónica es una de las técnicas más utilizadas para la caracterización morfológica de esporas de MA; no obstante, los protocolos reportados en trabajos previos no son descritos a detalle y tampoco son válidos para todos los tipos de muestras. Para evaluar la vitalidad de las esporas de MA, se emplean colorantes vitales como el FDA, el mismo que es convertido a un producto fluorescente por la actividad de diferentes enzimas localizadas en la membrana celular. En este trabajo se empleó un protocolo de limpieza de esporas con una solución de Tween 20 (3.75% V/V) y un proceso de deshidratación en un desecador de vidrio para su observación en el MEB. Adicionalmente, se trató las esporas con una solución de FDA (25 µM) para observarlas en el microscopio de fluorescencia y determinar su vitalidad. El protocolo de preparación utilizado para la visualización de las esporas de MA con el MEB nos permitió observar todas las estructuras. En cuanto a la tinción vital, se concluyó que el método es efectivo para esporas producidas in vitro y que no se encuentran en estado de latencia.