PENINGKATAN KERAGAMAN GENETIK PURWOCENG MELALUI IRADIASI SINAR GAMMA DAN SELEKSI IN VITRO

ABSTRAK Peningkatkan keragaman genetik purwoceng memerlukan aplikasi teknologi alternatif yang mampu membentuk keragaman baru. Tujuan penelitian adalah untuk meningkatkan keragaman genetik dan toleransi purwoceng terhadap cekaman suhu tinggi melalui iradiasi dan seleksi in vitro. Tahapan penelitian meliputi induksi mutasi kalus embriogenik dengan sinar gamma, seleksi in vitro dengan cekaman suhu tinggi, induksi perakaran  somaklon  putatif,  analisis  keragaman  genetik  secara flowcytometry, dan aklimatisasi somaklon putatif. Iradiasi dilakukan pada dosis 0, 1, 2, 3, 4, dan 5 Krad sedangkan seleksi in vitro dilakukan pada tiga level suhu (20, 25, dan 30 0 C). Induksi perakaran dilakukan dalam dua tahap, dengan menggunakan media DKW atau MS yang mengandung sukrosa 3-6% dengan penambahan IBA atau NAA taraf 0,5-1,5 ppm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kalus purwoceng mampu bertahan hidup pada dosis iradiasi tertinggi (5 Krad). Meningkatnya dosis iradiasi cenderung meningkatkan pendewasaan embrio somatik. Pada tahap seleksi in vitro, kalus purwoceng mampu tumbuh pada kondisi suhu tertinggi (30 0 C). Tingkat proliferasi kalus yang tinggi dan jumlah embrio somatik terbanyak diperoleh dari perlakuan suhu 25 0 C. Embrio somatik yang terbentuk dari perlakuan suhu tinggi tersebut merupakan kandidat somaklon yang toleran suhu tinggi pada lingkungan dataran rendah. Diantara embrio somatik yang terbentuk, hanya embrio yang berasal dari perlakuan suhu 20 0 C saja yang berhasil membentuk planlet. Media yang terbaik untuk induksi perakaran adalah media MS yang mengandung sukrosa 4% dengan penambahan NAA 1,5 ppm. Analisis ploidi pada daun embrio somatik menunjukkan terbentuknya varian yang bersifat tetraploid (4x). Kata kunci: Pimpinella pruatjan, iradiasi sinar gamma, seleksi in vitro, keragaman genetik, suhu tinggi ABSTRACT To improve new pruatjan genetic variations, the alternative technology should be applied. The objective of the research was to increase pruatjan genetic variation and tolerance to the high temperature through induced mutation and in vitro selection. The steps of this study were induced mutation of embryogenic callus by gamma irradiation, in vitro selection, root induction of putative somaclones, genetic variation analysis by flowcytometer, and putative somaclones acclimatization. The dosages of gamma irradiation were 0, 1, 2, 3, 4, and 5 Krad. In vitro selection was conducted at three temperatures (20, 25, and 30 0 C). The root induction was conducted in two steps by using DKW or MS media containing of 3-6% sucrose with addition of 0.5-1.5 ppm IBA or NAA. The result showed that embryogenic calli could survive after treatment of the highest gamma irradiation dose. It tends to increase the maturation of somatic embryos. During in vitro selection, embryogenic calli could grow at the highest temperature but the highest callus proliferation and the number of somatic embryos were obtained from 25 0 C. The somatic embryos survived and grew at the high temperature are assumed as somaclones which considered as the candidates of tolerant plants to high temperature that can be developed in the of low altitude area. Among the regenerated somatic embryos, only the 20 0 C-derived embryos were successfully form plantlets. The best medium for root induction was MS basal medium containing of 4% sucrose supplemented with 1.5 ppm NAA. The ploidy analysis of somatic embryos leaf showed a tetraploid (4x) variant. Key words: Pimpinella pruatjan, gamma irradiation, in vitro selection, genetic variation, high temperature