Методологические аспекты определения оксимов стероидных гормонов методом УВЭЖХ-МСВР

Рассмотрены методологические аспекты применения дериватизации стероидных гормонов с использованием гидроксиламина для дальнейшего количественного анализа производных андрогенов, эстрогенов, прогестинов и глюкокортикоидов. Известно, что его использование позволяет значительно увеличить чувствительность масс-спектрометрического детектирования некоторых стероидных гормонов ввиду образования легко ионизирующихся оксимов стероидов, а реакция получения производных является простой. Однако наряду с перечисленными достоинствами, при использовании данного способа происходит образование стереоизомеров, что приводит к расщеплению или полному разделению пиков дериватов на хроматограммах. Изменение программы градиентного элюирования не всегда позволяет получить один пик деривата без потери эффективности и селективности разделения остальных аналитов, присутствующих в пробе, что делает актуальным вопрос выбора «мишени» для анализа. Принимая во внимание наличие выраженных матричных эффектов при проведении определения стероидных гормонов и их производных в биологических жидкостях с использованием метода ВЭЖХ-МС(/МС) с электрораспылительной ионизацией, подобное поведение веществ при их хроматографическом разделении может быть использовано для повышения точности и надежности получаемых результатов благодаря интегрированию не всех пиков дериватов, а путем выбора одного, наименее подверженного матричным эффектам, обусловленным, например, коэлюированием компонентов пробы. Это связано с тем, что в процессе протекания реакции формирование их изоформ происходит воспроизводимо, с одинаковым выходом, независимо от концентраций и матрицы, в которой протекает процесс. Приведены результаты определения некоторых оксимов стероидных гормонов, рассмотрены аспекты, влияющие на точность, воспроизводимость и чувствительность анализа на примере определения оксимов эстрона и 11α-гидроксипрогестерона в диапазоне концентраций от 2.5 до 1000 нг/см3. Идентификация производных и контроль полноты протекания реакции проводили с использованием стандартных образцов исследуемых соединений и масс-спектрометрии высокого разрешения. Показано, что данная процедура дериватизации позволяет добиться значительно большей чувствительности по сравнению с подходами, основывающимися на прямом определении стероидных гормонов с использованием ВЭЖХ-МС(/МС). В случае необходимости чувствительность может быть повышена путем применения методов предварительного концентрирования и очистки образцов.