Подтверждение порядка элюирования продуктов взаимодействия гентамицина с ортофталевым альдегидом по скорости реакции дериватизации

Целью работы является подтверждение порядка элюирования продуктов взаимодействия компонентов гентамицина с ортофталиевым альдегидом (ОФА) по скорости реакции дериватизации в присутствии ДМСО, а также оценка влияния содержания ДМСО в смеси на скорость реакции. Гентамицин – антибиотик широкого спектра действия, широко используемый в медицине. Структурные компоненты гентамицина различаются количеством и положением метильных радикалов, замещающих атомы водорода одной из аминогрупп. Оптимизировано разделение продуктов взаимодействия компонентов гентамицина с ОФА в обращенно-фазовой системе с использованием смеси ацетонитрил – вода – хлорная кислота – аммиак в качестве подвижной фазы. При оптимизации условий разделения производных гентамицина и ОФА было показано, что разделение пиков улучшалось при переходе рН солевой составляющей подвижной фазы от 2.5 к 6.1. Кроме этого, был подобран профиль градиента, обеспечивающий минимальную продолжительность анализа при полном разделении компонентов. Изучено влияние содержания ДМСО на скорость дериватизации и стабильность продуктов реакции. Показано, что содержание органического растворителя в диапазоне 20÷30 об.% обеспечивает максимальную стабильность образующихся продуктов. Установлено, что скорость реакции дериватизации максимальная для продукта, элюирующегося первым, минимальна – для последнего из них и имеет промежуточную величину для компонентов с промежуточными временами удерживания. Скорость реакции зависит от количества метильных заместителей аминогруппы и их положения, что оказывает стерическое влияние на взаимодействие компонентов с реагентом. Гидрофобность разделяемых продуктов также зависит от этих факторов, что объясняет корреляцию порядка элюирования со скоростью реакции дериватизации. Полученные закономерности могут быть использованы при разработке методик анализа органических веществ и их смесей методом ВЭЖХ с предколоночной дериватизацией.