Исследование молекулярно-массового распределения природных полисахаридов и полиацетиленов методом многомерной хроматографии

Методом многомерной жидкостной хроматографии с использованием ГПХ и обращеннофазовой адсорбционной хроматографии, исследовано молекулярно-массовые и функциональные харктеристики продуктов биосинтеза полисахаридов и полиацетиленовых соединений, базидиальными грибами рода Ganoderma lucidum и Pleurotus ostreatus. Указанные грибы выращивались методом глубинного культивирования в среде, состоящей из пшеничных отрубей на среде Чапека-Докса следующего состава (г/дм3): NaNO3 -2, K2HPO4 -1, MgSO4·7H2O-0.5, KCl-0.5, FeSO4·H2O-0.01, глюкоза-30 и H2O. Культивирование проводилось в термостате при 28оС. После 10 суток выдержки в составе их мицелл обнаружены полисахариды и полиацетиленовые соединения. Далее образующуюся биомассу грибов измельчали и экстрагировали метиловым эфиром уксусной кислоты и водой. Осадок и экстракт в отдельности разделены в указанной хроматографической системе. Установлено, что в водном экстракте количество полисахаридов достигает до 70-80%, а в эфирном экстракте содержание полиацетиленовых соединений меняется в пределах 65-70%. Таким образом, метод GPC позволил выявить в составе продуктов биосинтеза 5 фракций, в том числе 4 полисахаридов, состоящие из гексаозы (Мw=Mn=1085), гептаозы (Мw=Mn=1260) и из двух олигосахаридов с Мw и Mn 4390, 3600 и 5450, 4500, соответственно, и одна полиацетиленовая (Мw =180, Mn =150). Методом обращенно-фазовой адсорбционной хроматографии в рабочей волне УФ-детектора в составе полиацетиленовой фракции обнаружены 5 подфракций по химической природе относяхщихся к полиацетиленовым кислотам и спиртам сопряженными двойными и тройными связями в различных сочетаниях. С целью изучения химического состава обнаруживаемых подфракции, фракция полиацетилена подвергнута препаративному разделению. Разделение обеспечено в условиях повышенной концентрации экстракта, многократным сбором фракции по соответствующим пикам на АЖХ хроматограмме, которые далее были подвергнуты ИК-спектральному анализу и установлен их функциональный состав. Состав полиацетиленновых соединений подтвержден также хроматографически по объемам удерживания испытываемых соединений с применением соответствующих эталонов.