Open AccessDetection of mouse hepatitis virus in mouse colonies using the nested polymerase chain reaction
Author(s) -
Alzira Batista Cecílio,
Alexandre Luna Cândido,
M. Resende,
Elizabete Dias Bontempo,
Almir de Sousa Martins
Publication year - 2000
Publication title -
arquivo brasileiro de medicina veterinária e zootecnia/arquivo brasileiro de medicina veterinária e zootecnia
Language(s) - English
Resource type - Journals
SCImago Journal Rank - 0.213
H-Index - 33
eISSN - 1678-4162
pISSN - 0102-0935
DOI - 10.1590/s0102-09352000000400003
Subject(s) - polymerase chain reaction , nested polymerase chain reaction , virology , reverse transcriptase , biology , microbiology and biotechnology , real time polymerase chain reaction , reverse transcription polymerase chain reaction , hepatitis b virus dna polymerase , virus , polymerase , hepatitis b virus , gene , messenger rna , genetics
A reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) to detect mouse hepatitis virus (MHV) in hepatic tissue was developed. To circumvent possible failures in RT-PCR amplifications, a second round of PCR with internal primers was used to confirm the specificity and increase the sensitivity of the test. Using this method specific amplification of MHV sequences was observed in 18 out of 20 mouse colonies examined. Desenvolveu-se a técnica de transcrição reversa - reação em cadeia pela polimerase para detectar o vírus da hepatite do camundongo em tecido hepático. Para se eliminar possíveis falhas na reação de amplificação RT-PCR usou-se um segundo ciclo de amplificação com primers internos para confirmar a especificidade e aumentar a sensibilidade do teste. Após a optimização do protocolo, descreve-se a detecção da amplificação específica da seqüência-alvo em camundongos de 18 das 20 colônias examinadas