Open AccessCLONING, EXPRESSION, AND PARTIAL PURIFICATION OF PLANTARICIN W LOCUS PRODUCED BY Lactobacillus plantarum S34
Author(s) -
Rifqiyah Nur Umami,
Apon Zaenal Mustopa,
Linda Sukmarini,
Hasim Danuri,
Andini Setyanti Putri,
Krisna Dwi Aria Wibowo
Publication year - 2017
Publication title -
berita biologi/berita biologi
Language(s) - Slovenian
Resource type - Journals
eISSN - 2337-8751
pISSN - 0126-1754
DOI - 10.14203/beritabiologi.v16i1.2174
Subject(s) - microbiology and biotechnology , plasmid , biology , lactobacillus plantarum , chemistry , bacteria , gene , genetics , lactic acid
Lactobacillus plantarum S34 dilaporkan mempunyai aktivitas antibakteri yang terkait dengan produksi bakteriosin. Bagian dari gen yang menyandikan salah satu lokus bakteriosin yang diproduksi oleh L. plantarum S34, disebut dengan plantarisin W (plnW), diamplifikasi dari plasmid dan dikloning menggunakan sistem vektor pGEM®-T Easy ke dalam Escherichia coli DH5?. Sekuens nukleotida plnW (± 405 pb) diidentifikasi sebagai protein integral membran. Lebih lanjut, plnW diekspresikan secara heterologus sebagai fusi protein dengan His(6)-tag tioredoksin menggunakan vektor ekspresi pET-32a(+) ke dalam E. coli BL21 (DE3) pLysS. Protein fusi rekombinan plnW terdapat dalam sitoplasma sel, tetapi selain fraksi terlarut terdapat juga fraksi tidak terlarut berupa badan inklusi. Purifikasi parsial dilakukan menggunakan kromatografi afinitas ligan Co2+ untuk fraksi terlarut dan metode elektroelusi gel poliakrilamid untuk fraksi tidak terlarut. Massa molekul berukuran kurang lebih 33 kDa terdeteksi berdasarkan pemisahan SDS-PAGE dan dikonfirmasi dengan Western blot sebagai protein fusi rekombinan plnW. Protein yang sudah terpurifikasi bermanfaat untuk mengetahui kaitan antara struktur dan fungsi bakteriosin.