Ανάπτυξη και επικύρωση πολυ-υπολειμματικών μεθόδων (LC-PDA και LC-QTOF-MS) για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό αντιμικροβιακών καταλοίπων και μεταβολιτών τους στο μυϊκό ιστό του λαβρακίου

Σκοπός της διατριβής ήταν η ανάπτυξη κατάλληλων χρωματογραφικών μεθόδων για τον ταυτόχρονο διαχωρισμό και ποσοτικό προσδιορισμό διάφορων ομάδων αντιμικροβιακών παραγόντων (κινολόνες, τετρακυκλίνες, σουλφοναμίδια και διαμινοπυριμιδίνες, καθώς και κάποιων μεταβολιτών τους) σε μυϊκό ιστό λαβρακιού (μυς + δέρμα σε φυσική αναλογία) με την τεχνική της Υγρής Χρωματογραφίας Υψηλής Πίεσης-HPLC-UPLC, σε συνδυασμό με διάφορους ανιχνευτές, όπως ο ανιχνευτής παράταξης φωτοδιόδων PDA και ο φασματογράφος μαζών με αναλυτή χρόνου πτήσης TOF-MS. Όλες οι αναπτυσσόμενες μέθοδοι επικυρώθηκαν σύμφωνα με τα κριτήρια της Ευρωπαϊκής απόφασης 2002/657/ΕΕ, ως προς τη γραμμικότητα, την εκλεκτικότητα, την ευαισθησία, τα όρια ανίχνευσης (LODs), τα όρια ποσοτικής αποτίμησης (LOQs), την επαναληψιμότητα, τη σταθερότητα, τα όρια ανίχνευσης CCα και την ικανότητα ανίχνευσης CCβ. Παράλληλα κατά τη διάρκεια της διδακτορικής διατριβής, εκτός από την ανάπτυξη χρωματογραφικών μεθόδων, πραγματοποιήθηκαν και δύο βιολογικοί πειραματισμοί για τον υπολογισμό του χρόνου αναμονής (Wt) της φθοροκινολόνης ντανοφλοξασίνης (DANO) σε δύο θερμοκρασίες θαλασσινού νερού, έπειτα από χορήγηση φαρμακούχου ιχθυοτροφής. Οι αναλυτικές μέθοδοι που αναπτύχθηκαν και επικυρώθηκαν στην παρούσα διδακτορική διατριβή ήταν απλές, γρήγορες και εύχρηστες. Η ανάπτυξη μεθόδου για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό της DANO και του μεταβολίτη της σε μυϊκό ιστό ιχθύος έγινε για πρώτη φορά. Η προκατεργασία των δειγμάτων και στις τρεις αναπτυχθείσες μεθόδους ήταν απλή, γρήγορη, με μικρό κόστος αναλωσίμων και επαρκή απομάκρυνση των παρεμποδίσεων του υποστρώματος. Ο βιολογικός πειραματισμός εύρεσης του Wt της DANO σε κάποιο ευρωπαϊκό είδος ιχθύος έγινε για πρώτη φορά. Επίσης, η ανίχνευση και ταυτοποίηση των 20 αντιβιοτικών με χρήση του συστήματος UPLC-QTOF-MS και συγκεκριμένα με την εφαρμογή της τεχνικής MSE σε μυϊκό ιστό λαβρακιού, δεν έχει αναφερθεί έως τώρα στη βιβλιογραφία. Όλες οι μέθοδοι που αναπτύχθηκαν, επικυρώθηκαν με βάση την απόφαση 2002/657/ΕΕ της Ευρωπαϊκής Ένωσης και μπορούν εύκολα να χρησιμοποιηθούν για ελέγχους παρουσίας καταλοίπων των συγκεκριμένων αντιμικροβιακών παραγόντων στο βρώσιμο ιστό των ιχθύων, προκειμένου να διασφαλιστεί η προστασία του καταναλωτή.