Μελέτες στη βιολογική σημασία των ανθρώπινων αποαδενυλασών και ο ρόλος τους σε νοσήματα του πνεύμονα

Εισαγωγή: Στις νεοπλασίες, η απορρύθμιση της σταθερότητας των mRNAs μπορεί να οδηγήσει σε απώλεια ελέγχου της γονιδιακής έκφρασης. Η αποαδενυλίωση είναι συνήθως το στάδιο που καθορίζει το ρυθμό της αποικοδόμησης και καταστολής της μετάφρασης του mRNA και οι αποαδενυλάσες τα ένζυμα μέσω των οποίων γίνεται η βράχυνση των πολυ(Α) ουρών των ευκαρυωτικών mRNAs. Η απάντηση στο ερώτημα γιατί να υπάρχουν τόσες αποαδενυλάσες δεν είναι σαφής. Σκοπός: Ερευνάται η διαφοροποίηση της έκφρασης των αποαδενυλασών σε καρκινικούς ιστούς πνεύμονα, σε σχέση με παρακείμενο φυσιολογικό ιστό, ενώ παράλληλα μελετάται η έκφρασή τους και στην οξεία λευχαιμία, για να εξεταστεί η καθολικότητα του φαινομένου. Επίσης αποσιωπούμε τα ένζυμα σε καρκινικές κυτταρικές σειρές και να εξετάσουμε την επίπτωση που έχουν στην γονιδιακή έκφραση. Υλικά και μέθοδοι: Μετρήθηκαν τα επίπεδα mRNAs των αποαδενυλασών με Ποσοτική PCR Πραγματικού Χρόνου (RT-PCR) σε ασθενείς που διαγνώστηκαν με οξεία λεμφοκυτταρική ή μυελογενή λευχαιμία, καθώς και ασθενείς που διαγνώστηκαν με πλακώδες καρκίνωμα του πνεύμονα. Η αποσιώπηση των αποαδενυλασών έγινε στις κυτταρικές σειρές NCI-H520 και HEp2 εισάγοντας shRNAs που στοχεύουν την κάθε αποαδενυλάση μέσω του μηχανισμού του RNAi. Η ανάλυση της έκφρασης έγινε με μικροσυστοιχίες σε επίπεδο ολόκληρου του γονιδιώματος, καθώς και με RT-PCR σε συγκεκριμένους παράγοντες. Αποτελέσματα: Η έκφραση των αποαδενυλασών μεταβάλλεται τόσο σε ασθενείς πλακώδες καρκίνωμα αλλά και με οξεία λευχαιμία. Η έκφραση των PARN, CNOT6 και NOC συσχετίζεται με κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά και με την πρόγνωση των ασθενών. Η ανάλυση της έκφρασης έδειξε πως υπάρχουν συγκεκριμένα μετάγραφα και μονοπάτια που είναι πιθανοί στόχοι μόνο μιας αποαδενυλάσης, ενώ τα περισσότερα ελέγχονται από περισσότερα ένζυμα λόγω αντισταθμιστικής δράσης των αποαδενυλασών. Συμπεράσματα: Αν και ο μηχανισμός δράσης των αποαδενυλασών παραμένει μια τεράστια πρόκληση, είναι όλο και πιο σαφές ότι οι διάφορες αποαδενυλάσες διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο σε διάφορες κυτταρικές διεργασίες ρυθμίζοντας τη ζωή των mRNAs