Καλλιέργεια ενδοθηλιακών κυττάρων κερατοειδούς σε διαφορετικά υποστρώματα και μελέτη των μηχανικών τους ιδιοτήτων

1) Σκοπός: Διερεύνηση ικανότητας καλλιεργημένων κυττάρων να αφυδατώσει τεχνητό στρώμα κολλαγόνου. Μέθοδος: Ενδοθηλιακά κύτταρα καλλιεργήθηκαν και τοποθετήθηκαν σε τεχνητό στρώμα και τέσσερα διαφορετικές διατάξεις. Το κεντρικό πάχος των δομών ήταν η κύρια μετρήσιμη παράμετρος. Αποτελέσματα: Μετά από δυο ημέρες η μείωση του πάχους του τεχνητού στρώματος ήταν 66% για τη διάταξη 1, 57% για τη 2 και 13% για τη διάταξη 3. Συμπεράσματα: Η ικανότητα των καλλιεργηθέντων κυττάρων επηρεάζεται από το πάχος της βασικής τους μεμβράνης. 2) Σκοπός: Να διερευνηθεί αν το ανθρώπινο πρόσθιο περιφάκιο είναι κατάλληλο υπόστρωμα για την καλλιέργεια κυττάρων του γωνιακού δικτυωτού. Μέθοδοι: Κύτταρα γωνιακού δικτυωτού από τέσσερεις δότες τοποθετήθηκαν πάνω στα πρόσθια τμήματα ανθρώπινου περιφακίου. Η μορφολογία των κυττάρων και η ικανότητά τους να επιζήσουν εξετάστηκαν τις ημέρες 1, 3, 5 και 7 μετά την έναρξη της διαδικασίας καλλιέργειας. Αποτελέσματα: Η μορφολογία των κυττάρων που καλλιεργήθηκαν ήταν όμοιο με το τυπικό μοντέλο ενώ η επιβίωση του ήταν >95% σε όλες τις περιπτώσεις. Συμπέρασμα: Το ανθρώπινο πρόσθιο περιφάκιο μπορεί να θεωρηθεί κατάλληλο υπόστρωμα για την καλλιέργεια ανθρωπίνων κυττάρων του γωνιακού δικτυωτού.3) Σκοπός: Να προσδιοριστεί η χρονοεξαρτώμενη τοξικότητα του Trypan blue (TB) συγκέντρωσης 0.06% σε καλλιεργημένα ανθρώπινα κύτταρα του γωνιακού δικτυωτού. Μέθοδοι:. Τα κύτταρα εκτέθηκαν για 5, 30, 60 δευτερόλεπτα και για 5,15,30,60 λεπτά σε TB. Αποτελέσματα: Σημαντικές μορφολογικές αλλαγές έλαβαν χώρα μετά από 5 λεπτά έκθεσης. Η βιωσιμότητα ήταν 96.0%±3.6%, 94.8%±3.5% and 92.5%±4.4% μετά από 5,30 και 60 δευτερόλεπτα έκθεσης; σημαντική τοξική επίδραση του TB παρατηρήθηκε μετά από 5,15,30 και 60 λεπτά έκθεσης. Συμπεράσματα: Το TΒ δεν είναι τοξικό για έκθεση έως και 60 δευτερόλεπτα; έκθεση μεγαλύτερης διάρκειας οδηγεί σε αυξανόμενες βλάβες των καλλιεργημένων κυττάρων του γωνιακού δικτυωτού.4) Σκοπός: Η αξιολόγηση της τοξικής επίδρασης του αέρα στα ενδοθηλιακά κύτταρα του κερατοειδούς. Μέθοδος: Ανθρώπινα ενδοθηλιακά κύτταρα κερατοειδούς καλλιεργήθηκαν και εκτέθηκαν σε αέρα για 30 λεπτά, 1,3,4,12 και 24 ώρες. Αποτελέσματα: Στις 3 ώρες τα κύτταρα διατήρησαν τη μορφολογία τους ενώ μετά από 6 ώρες έχασαν την εξαγωνικότητά τους. Συμπεράσματα: Η μελέτη έδειξε ότι η τοξική επίδραση του αέρα στο συγκεκριμένο μοντέλο δεν είναι σημαντική για το διάστημα των τριών ωρών.5) Σκοπός: Η αξιολόγηση της τοξικής επίδρασης του αέρα στα ενδοθηλιακά κύτταρα του γωνιακού δικτυωτού. Μέθοδος: Κύτταρα του γωνιακού δικτυωτού καλλιεργήθηκαν και εκτέθηκαν σε αέρα (μέσω ενός in vitro μοντέλου) για 30 λεπτά, 1,3,6,12 και 24 ώρες. Αποτελέσματα: Στις 3 ώρες τα κύτταρα δεν υπέστησαν καμία μεταβολή ενώ στις 6 ώρες άρχισαν να εμφανίζονται μορφολογικές αλλοιώσεις. Στις 12 ώρες τα κύτταρα έχασαν την τυπική μορφολογία τους. Συμπεράσματα: Η τοξικότητα του αέρα δεν είναι σημαντική για χρόνο έκθεσης ως 3 ώρες. 6) Σκοπός: Αξιολόγηση της επίδραση του μεγέθους της ασκούμενης δύναμης στον προσδιορισμό του μέτρου ελαστικότητας του προσθίου περιφακίου με τη χρήση του μικροσκοπίου ατομικών δυνάμεων. Μέθοδος: Τέσσερα ανθρώπινα περιφάκια λήφθησαν κατά τη διάρκεια επεμβάσεως φακοθρυψίας και μελετήθηκαν, χωρίς την παρουσία επιθηλιακών κυττάρων, με τη χρήση μικροσκοπίου ατομικών δυνάμεων. Καμπύλες δύναμης-απόστασης υπολογιστήκαν μετά την εφαρμογή δυνάμεων τάξης 2,5,10,20 και 30 nanonewtons. Συμπεράσματα: Δυνάμεις της τάξης των 10 και 20 nanonewtons οδήγησαν σε αποτελέσματα χωρίς σημαντικές διαφορές.