Immunofluorescent Evidence for a Specific Binding Site for Phenytoin in the Cerebellum

Summary: The regional distribution of phenytoin in the brains of experimental animals was studied using the indirect fluorescent antibody technique. Using antibodies directed against phenytoin, we observed a specific pattern of staining the Purkinje and granule cell layers of the cerebellum. An identical pattern of staining was seen in phenytoin‐treated and untreated animals. Several control procedures and studies indicated that the observed pattern was not caused by nonspecific staining or autofluorescence. The distinctive staining pattern obtained using this technique can be attributed to the high molecular specificity of antigen‐antibody reactions and a discrete binding site for phenytoin in the vicinity of cerebellar Purkinje and granule cells. RESUMEN Utilizando la técnica de anticuerpos con fluorescencia indirecta se ha estudiado la distribución regional de la fenitoina en cerebros de animales experimentales. Usando anticuerpos anti‐fenitoina, hemos observado en un partón específico de teñido en las células de Purkinje y en la capa de células de gránulos del cerebelo. Un partón de teñido idéntico también se encontró en los animales que no habían recibido la droga. Varios estudios de control indican que el partón observado no fué producido por teñido inespecífico o autofluorescencia. El partón distintivo conseguido con esta técnica puede atribuirse a la elevada especificidad molecular de las reacciones antígeno‐anticuerpo y al selectivo lugar de ligadura de la fenitoina en la ve‐cindad de las capas de células de Purkinje y gránulos en el cerebelo. ZUSAMMENFASSUNG Die regionale Verteilung des Phenytoins in den Gehirnen von Versuchstieren wurde mit Hilfe der indirekten Antikörperfluoreszenztechnik untersucht. Mit Hilfe von Antikörpern gegen Phenytoin beobachteten wir ein spezifisches Muster der Anfärbung in der Pur‐kinjezellschicht und in den Zellschichten des Cerebellum. Ein identisches Muster der Anfärbung existierte auch in den Gehirnen von Tieren, die keine Medikamente erhalten hatten. Verschiedene Kontroll‐prozeduren und Untersuchungen zeigten, daß das beobachtete Muster nicht durch unspezifische Anfärbung oder Autofluoreszenz hervorgerufen wurde. Die deutliche Anfärbung mit Hilfe dieser Technik muß der hochmolekularen Spezifität der Antigen‐Antikörper‐reaktion und einer deutlichen Bindungsstelle für das Phenytoin in der Nachbarschaft der Purkinje‐ und Körnerzellen des Kleinhirns zugeschrieben werden.