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Immunological and chemical characterization of glycoproteins in IEF fractions of Blastomyces dermatitidis yeast lysate antigen
Author(s) -
Fisher M. A.,
Legendre A. M.,
Scalarone G. M.
Publication year - 1997
Publication title -
mycoses
Language(s) - English
Resource type - Journals
SCImago Journal Rank - 1.13
H-Index - 69
eISSN - 1439-0507
pISSN - 0933-7407
DOI - 10.1111/j.1439-0507.1997.tb00192.x
Subject(s) - blastomyces dermatitidis , glycoprotein , antigen , blastomyces , microbiology and biotechnology , blastomycosis , isoelectric focusing , chemistry , lysis , biochemistry , yeast , biology , enzyme , immunology
Summary. After isoelectric focusing (IEF), fractions of a Blastomyces dermatitidis yeast lysate antigen were analysed for the presence of glycoproteins that may lead to cross‐reactivity in immunoassays for the diagnosis of blastomycosis. Five major glycoproteins were apparent, two of which showed cross‐reactivity when used in Western blots with sera obtained from dogs with histoplasmosis and coccidioidomycosis. These five glycoproteins were characterized for linkage to the proteins using N ‐glycosidase F (NGF) and for their lectin binding properties. The cross‐reactive 235‐ and 160‐kDa glycoproteins were found to possess mainly O‐linked, high‐mannose‐type carbohydrates, and periodate‐mediated oxidation of these molecules eliminated cross‐reactivity observed with heterologous sera. Thus, the periodate‐treated IEF antigens described here may be useful in solid‐phase enzyme immunoassays for the diagnosis of blastomycosis. Zusammenfassung. Nach isoelektrischer Fokussierung (IEF) wurden die Lysat‐Antigenfraktionen der Hefephase von Blastomyces dermatitidis auf Glykoproteingehalt untersucht, der zu Kreuzreaktionen in der Serodiagnostik der Blastomykose führen könnte. Fünf Glykoproteine waren nachweisbar, von denen zwei Kreuzreaktivität in Westernblots mit Seren von Histoplasmose‐und Coccidioidomykose‐kranken Hunden zeigten. Die fünf Glykoproteine wurden hinsichtlich ihrer Proteinbindung über N‐Glykosidase F (NGF) und hinsichtlich ihrer Lektinbindungseigenschaften charakterisiert. Die kreuzreagierenden 235‐ und 160‐kDa‐Glykoproteine enthielten Mannose‐betonte Kohlenhydrate, und die Peijodat‐Oxidation dieser Moleküle eliminierte die Kreuzreaktivität mit heterologen Seren. Daher werden die hier beschriebenen Perjodat‐behandelter. IEF‐Antigene als geeignet angesehen für den Einsatz in Festphase‐Enzymimmunassays für die Blastomykosediagnostik.