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Detection of Candida albicans DNA with a yeast‐specific primer system by polymerase chain reaction
Author(s) -
Wildfeuer A.,
Schlenk R.,
Friedrich W.
Publication year - 1996
Publication title -
mycoses
Language(s) - English
Resource type - Journals
SCImago Journal Rank - 1.13
H-Index - 69
eISSN - 1439-0507
pISSN - 0933-7407
DOI - 10.1111/j.1439-0507.1996.tb00150.x
Subject(s) - candida albicans , primer (cosmetics) , polymerase chain reaction , yeast , biology , microbiology and biotechnology , nested polymerase chain reaction , dna , gene , chemistry , biochemistry , organic chemistry
Summary. The in vitro and in vivo selectivity and sensitivity of a yeast‐specific primer system was investigated. A two‐step polymerase chain reaction (PCR) was used: the first amplified a 245‐bp fragment of the gene for cytochrome P450L 1 A 1 and the second a product of 193 bp. This nested PCR produced an approximately 1000‐fold increase in the sensitivity of the test for Candida albicans DNA compared with the first primer pair. The lower level of sensitivity of the test in physiological saline and tissue homogenate was about 10 C. albicans cells ml ‐1 . On the other hand, the sensitivity of the nested PCR method was reduced by a factor of more than 1000 when C. albicans was fixed with 4% formalln. After i.v. injection of different doses of C. albicans into mice, the yeast could be demonstrated in blood and in six different organs. The nested PCR was to some extent more sensitive than culturing for the detection of the yeast in the specimens of organs such as lung, cardiac muscle, liver, kidneys and brain. In contrast, in blood and spleen the culture was superior to the PCR technique used. Nested PCR is thus a useful additional method for the demonstration of yeasts. Zusammenfassung. Die Selektivität und Sensitivität eines hefespezifischen Primersystems wurde unter experimentellen Bedingungen überprüft. Dabei folgte einer ersten PCR, deren Primerpaar ein Fragment (245 bp) des Gens für Cytochrom P450L 1 A 1 amplifiziert, eine weitere PCR mit einem zweiten Primerpaar. Mit dieser nested PCR, die ein Produkt von 193 bp amplifiziert, wurde die Sensitivität des Testes für Candida albicans ‐DNA etwa 1000fach erhöht. Die untere Grenze des Nachweises in vitro lag in physiologischer Kochsalzlösung und in einem Gewebehomogenat bei ca. 10 C. albicans ‐Zellen ml ‐1 . Die Empfindlichkeit der PCR nahm allerdings stark ab (> 1000fach), wenn C. albicans mit 4%igem Formalin fixiert wurde. Nach i.v. Injektion von C. albicans in Mäusen wurde der Sproßpilz, abhängig von der Infektionsdosis, im Blut und sechs verschiedenen Organen nachgewiesen. Dabei erwies sich die nested PCR beim Nachweis der Hefe in Organen wie Lunge, Herzmuskel, Leber, Nieren und Gehirn etwas empfindlicher als die Kultur. Allerdings war in Blut und Milz die Kultur der unter‐suchten PCR überlegen. Die nested PCR wird als eine zusätzliche Methode für den Nachweis von Sproßpilzen vorgeschlagen.