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Immunogenic potential of Aspergillus nidulans subcellular fractions and their polypeptide components
Author(s) -
Puente P.,
Fernandez N.,
Ovejero M. C.,
Leal F.
Publication year - 1992
Publication title -
mycoses
Language(s) - English
Resource type - Journals
SCImago Journal Rank - 1.13
H-Index - 69
eISSN - 1439-0507
pISSN - 0933-7407
DOI - 10.1111/j.1439-0507.1992.tb00854.x
Subject(s) - aspergillus nidulans , antigen , microbiology and biotechnology , chemistry , western blot , titer , immunogen , cytosol , antibody , biology , biochemistry , enzyme , immunology , monoclonal antibody , mutant , gene
Summary. Cell‐free extracts of the asco‐mycetous fungus Aspergillus nidulans were separated into three subcellular fractions: cell walls, total membranes and cytosol, and two different immunization protocols were used to raise antibodies against them in 12 New Zealand rabbits. The immune response was followed over time by dot and Western blot analyses to determine the immunogenic potential of each individual fraction and their polypeptide components. The IgG fractions, purified from pools of the best sera, were used to analyze in detail the antigenic composition of A. nidulans mycelium. The fast immunization protocol provided a much earlier response and higher sera titres. Cytosols and membranes were more immunogenic than cell walls and, in most cases, a positive correlation was shown between the titre of each serum and the number of detected antigens. The polypeptides of A. nidulans included six major immunodominant antigens of the molecular weights ranging between 13 and 200 kDa. Zusammenfassung. Zellextrakte von Aspergillus nidulans wurden zu drei Fraktionen aufgear‐beitet: Wände, Membranen und Zytosol wurden unter Anwendung zwei verschiedener Protokolle zur Immunisierung von 12 New‐Zealand‐Kaninchen benutzt. Mit Hilfe von Dot‐ und Western‐Blot‐Analysen wurde die Entwicklung der Immunantwort verfolgt, um das Immunogen‐potential jeder einzelnen Fraktion sowie ihrer Polypeptidkomponenten zu bestimmen. Aus Mischungen der besten Antiseren wurden die IgG‐Fraktionen gereinigt und dann zur Antigen‐Analyse des Myzels von A. nidulans verwendet. Die hochsten Titer und die fruhesten Antworten wurden bei Benutzung der schnellsten Immuni‐sierungsmethode erreicht. Die Zytosole und die Membranen erwiesen sich als die wirksamsten Immunogene. Zumeist waren Serumtiter und die Anzahl der erkannten Antigene positiv korreliert. Unter den Polypeptiden von A. nidulans fanden sich sechs wichtige immunodominante Antigene im Molekulargewichtsbereich zwischen 13 und 200 kDa.