Rotavirusnachweis in Faezes: Erfahrungen mit dem Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

Zusammenfassung 313 Kälber‐, 47 Ferkel‐ und 100 menschliche Faezesproben von an Durchfall erkrankten neugeborenen Patienten wurden mit Hilfe einer modifizierten Immunelektronenmikroskopie‐Technik (IEM) und im Enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA) vergleichend untersucht. In 112 Kälber‐ (36%), 2 Ferkel‐ (4 %) und 21 (21 %) menschlichen Faezesproben konnte Rotavirus oder ‐antigen nachgewiesen werden. Die Sicherheit der Methodik wurde zusätzlich anhand der Virusausscheidung von drei experimentell infizierten, kolostrumfrei aufgezogenen Kälbern überprüft. Der ELISA, bei dem Meerrettichperoxidase als Enzym verwendet wurde, war spezifisch und erwies sich im Vergleich zur IEM als empfindlicher. Bei 18 von insgesamt 136 positiven Proben gelang der Virusnachweis nur mit der IEM, diese Proben waren negativ im ELISA. In diesen Proben werden Virus‐Antikörperkomplexe vermutet. Weitere Untersuchungen sind notwendig, bevor der ELISA zum Rotavirusnachweis in der Routinediagnostik empfohlen werden kann. Summary Demonstration of Rotavirus in Faeces: Experiences with the Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) 313 calf, 47 piglet and 100 human faecal samples from newborn patients with diarrhea were investigated comparing a modified immune electron microscopy method and the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). In 112 (36 %) calf, 2 (4 %) piglet and 21 (21 %) human samples rotavirus or its antigen could be demonstrated. The suitability of the method was also tested by studying virus shedding of three experimentally infected, colostrum‐deprived calves. The ELISA, using horse‐radish peroxidase as enzyme and 5 amino‐salicylic acid as indicator, was very specific and showed a higher sensitivity compared to IEM. In 18 out of the 136 positive samples rotavirus could only be demonstrated by IEM; these samples were negative in the ELISA. It is assumed that these samples contain virus‐antibody complexes. Further investigations are necessary before the ELISA can be recommended as a routine diagnostic test. Résumé Mise en évidence de Rotavirus dans des matières fécales: Expériences avec ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) 313 maitères fécales de veaux, 47 de porcelets et 100 échantillons humains de patients nouveaux‐nés atteints de diarrhée ont été examinés en comparaison avec une technique immunologique modifiée en microscopie électronique (IEM) et avec ELISA. Rotavirus ou l'antigène ont pu être mis en évidence chez 113 veaux (36%), 2 porcelets (4%) et 21 enfants La fiabilité de la méthode a été en plus testée sur la base de l'excrétion du virus chez trois veaux infectés expérimentalement et privés de colostrum. (21 %). Le test ELISA, l'enzyme utilisée étant la peroxydase de Meerrettich, fut spécifique et s'est révélé plus sensible que IEM. La mise en évidence du virus a été possible dans 18 cas sur 136 positifs avec la méthode IEM, ces échantillons s'étant révélés négatifs avec ELISA. On a supposé l'existence de complexes virus‐anticorps dans ces échantillons. D'autres recherches sont nécessaires avant de pouvoir recommander le test ELISA pour la mise en évidence de Rotavirus dans le diagnostic de routine. Resumen Identificación de virus Rota en heces: Experiencia con el Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Se examinaron comparativamente 313 muestras de heces de terneros, 47 de lechones y 100 de niños, pacientes recién enfermos de diarrea, con ayuda de una técnica modificada de inmunomicroscopía de electrones (IEM) y en el Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA). En 113 muestras de heces de terneros (36 %), 2 de lechones (4 %) y 21 de niños (21 %) se pudo identificar virus o antígeno Rota. La seguridad de la metodología se controló además con ayuda de la eliminación de virus por tres terneros infectados experimentalmente, criados sin calostro. El ELISA, en el que se utilizó peroxidasa de rábano rusticano como enzima, era específico, resultando ser más sensible en comparación con la IEM. Solo en 18 de un total de 136 muestras positivas se logró la identificación de virus con la IEM, siendo estas pruebas negativas en el ELISA. Se sospecha que en estas muestras había complejos de anticuerpos de virus. Se precisa proseguir con las experiencias antes de poder recomendar el ELISA para la identificación de virus Rota en el diagnóstico de rutina. An dieser Stelle möchte ich Dr. D. Ellens und Dr. P. de Leeuw, Central Diergeneeskundig Instituut, Leystad, Holland, sehr herzlich für die Überlassung von Referenzmaterial und die Hilfe bei der Entwicklung des ELISA in unserem Labor danken.