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Fluorescence Measurement of Free Calcium in Liver Mitochondria of Rats using the Ca 2+ Indicator Fura‐2
Author(s) -
Loipführer A. M.,
ReichlmayrLais Anna M.,
Kirchgessner M.
Publication year - 1992
Publication title -
journal of animal physiology and animal nutrition
Language(s) - German
Resource type - Journals
SCImago Journal Rank - 0.651
H-Index - 56
eISSN - 1439-0396
pISSN - 0931-2439
DOI - 10.1111/j.1439-0396.1992.tb00610.x
Subject(s) - chemistry , microbiology and biotechnology , egta , calcium , nuclear chemistry , biology , organic chemistry
Zusammenfassung Fluoreszenzspektroskopische Bestimmung freien Calciums in Lebermitochondrien von Ratten mit dem Ca 2+ ‐Indikator fura‐2 Die Konzentration freien Calciums in Rattenleber‐Mitochondrien wurde unter Verwendung des fluoreszierenden, Ca 2+ ‐complexierenden Indikators fura‐2 bestimmt. Um die idealen Bedingungen für die Inkubation von Lebermitochondrien mit dem Indikatorvorläufer fura‐2AM zu ermitteln, wurde der Einfluß der Inkubation auf fura‐2‐ und fura‐2AM‐Konzentrationen in Mitochondrien und Inkubationslösungen sowie auf die Integrität der Mitochondrien bestimmt. Eine zehnminütige Inkubation bei 35°C mit einer fura‐2AM‐Konzentration von 5μM und einer Probenkonzentration von 3 mg Protein/ml Inkubationslösung erwies sie als ideal. Da die mitochondriale Ca 2+ ‐Konzentration in Mitochondrien, die bei 0°C in EGTA‐haltiger Pufferlösung aufbewahrt wurden, mit einer Rate von 0,1 nM/min abnahm, hatte die Bestimmung der Ca 2+ ‐Konzentration sofort nach der Isolation zu erfolgen. Die in Rattenlebermitochondrien gemessene freie Ca 2+ ‐Konzentration betrug 57,9 ± 5,2 nM (n = 5) bei einer Gesamtcalciumkonzentration von 2,91 ±0,25 nmol/mg Protein (n = 6).