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Liposome‐mediated gene transfer via sperm cells. High transfer efficiency and persistence of transgenes by use of liposomes and sperm cells and a murine amplification element
Author(s) -
Rottmann O.,
Antes R.,
Höfer P.,
Sommer B.,
Wanner G.,
Görlach A.,
Grummt F.,
Pirchner F.
Publication year - 1996
Publication title -
journal of animal breeding and genetics
Language(s) - English
Resource type - Journals
SCImago Journal Rank - 0.689
H-Index - 51
eISSN - 1439-0388
pISSN - 0931-2668
DOI - 10.1111/j.1439-0388.1996.tb00631.x
Subject(s) - microbiology and biotechnology , sperm , biology , exogenous dna , southern blot , plasmid , transgene , transfection , western blot , reporter gene , gene , gene expression , genetics
Summary Plasmid DNA was encapsulated in liposomes to protect from degradation and to support the incorporation into sperm cells. Transgenic spermatozoa carry the foreign DNA to the target cell when fertilizing the egg. Several plasmid constructs were transferred into rabbits, cattle and chicken. The plasmid apparently can persist when provided with a murine amplification promoting sequence. The transgeneity of sperm cells as well as fetuses or offspring was demonstrated by dot blot, Southern blot analysis and PCR. Expression of the transgene was shown as enzymatic activities of the reporter genes SEAP or β‐galactosidase and by gelelectrophoretic characterization of the expressed gene products. The transfer efficiency and the persistence of the gene constructs is significantly increased due to the use of sperm cells as gene carriers mediated by liposomes and the amplification element. Zusammenfassung Gentransfer mittels Liposomen und Spermien Plasmid‐DNA wurde in Liposomen eingeschlossen, um sie vor enzymatischem Abbau zu schützen und ihre Inkorporation in die Spermienzelle zu ermöglichen. Bei der Befruchtung bringt das Spermium die Fremd‐DNA in die Eizelle. Es wurden verschiedene Genkonstrukte in Kaninchen, Rind und Huhn übertragen. Das Plasmid kann offensichtlich persistieren, wenn es eine murine amplifikationsfördernde Sequenz enthält. Die Transgenität von Spermien, Feten und Nachkommen wurde mit Dot Blot, Southern Blot und PCR nachgewiesen, die Expression der Reportergene SEAP und β‐Galaktosidase gelelektrophoretisch bzw. enzymatisch charakterisiert. Der Einsatz von Spermien und Liposomen zur Genübertragung sowie die Verwendung einer ‘amplification promoting sequence' erhöhen die Transfereffizienz und die Persistenz der Genkonstrukte beträchtlich.

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