The Leydig insulin‐like peptide

Summary We have isolated and sequenced the cDNA and gene coding for a novel member of the insulin‐like hormone superfamily. The gene is expressed exclusively in prenatal and postnatal Leydig cells and in postnatal ovary. We have tentatively proposed the name Leydig insulin‐like (Ley I‐L) for the gene and its encoded protein. The porcine Leydig insulin‐like protein is synthesized as a 131‐amino acid preproprotein, which contains a 24 amino acid signal peptide. Comparison of the deduced amino acid sequence of pro‐Leydig insulin‐like protein predicts that the biologically active protein, after proteolytic processing of the C‐peptide, consists of a 32 residue‐long B‐chain and a 26‐residue‐long A‐chain. Western blot analyses with antiserum against a synthetic oligopeptide containing the amino acid sequence of the B‐chain confirm the proteolytic processing of the pro‐Ley I‐L peptide. Furthermore, we describe here the initial analysis of the Ley I‐L gene promoter by transient gene transfer studies. We show that the sequence between −186 and +13 of the porcine Ley I‐L gene contains sufficient information to direct preferential expression of the chloramphenicol‐acetyltransferase (CAT) reporter gene in Leydig cells and sequences important for negative regulation of Ley I‐L promoter activity are contained in the region between −960 and −186. Zusammenfassung Das Insulin‐ähnliche Peptid der Leydigzelle Wir haben die cDNA und das Gen für ein bislang unbekanntes Insulin‐ähnliches Hormon isoliert und charakterisiert. Das Gen ist ausschließlich in pränatalen‐ und postnatalen Leydigzellen sowie im Ovar exprimiert. Das Gen hat die Bezeichnung Ley I‐L ( L eydig I nsulin L ike) erhalten. Das Ley I‐L Protein wird als 131 Aminosäuren großes Präprotein synthetisiert, welches ein Signalpeptid aus 24 Aminosäuren enthält. Es ist anzunehmen, daß das biologisch aktive Ley I‐L Protein, nach Abspaltung des C‐Peptids, aus einer B‐Kette (32 Aminosäuren) und einer A‐Kette (26 Aminosäuren) besteht. Westernblot‐Analysen unter Verwendung eines Antiserums gegen ein synthetisches Oligopeptid der B‐Kette bestätigen diese Annahme. Wir berichten hier auch über unsere vorläufigen Analysen der Promotorregion des Ley I‐L Gens. Die Sequenz zwischen −186 bis +13 des Gens beinhaltet ausreichende Information für die präferentielle Expression des Chloramphenicolacetyltransferase Gens (CAT) als Reportergen in kultivierten Leydigzellen. Ferner sind Sequenzen nachweisbar (−960 bis −186), die für eine negative Regulation des Ley I‐L Gens in Frage kommen.