Premium
Evaluation of HLA Expression on Gametogenic Cells Isolated from Human Testis/Auswertung der HLA‐Expression von Keimzellen aus dem menschlichen Hoden
Author(s) -
Kowalik I.,
Kurpisz M.,
Jakubowiak A.,
Janecki A.,
Łukaszyk A.,
Szymczynski G.
Publication year - 2009
Publication title -
andrologia
Language(s) - English
Resource type - Journals
SCImago Journal Rank - 0.633
H-Index - 59
eISSN - 1439-0272
pISSN - 0303-4569
DOI - 10.1111/j.1439-0272.1989.tb02401.x
Subject(s) - percoll , microbiology and biotechnology , human leukocyte antigen , radioimmunoassay , monoclonal antibody , biology , antigen , antibody , chemistry , immunology , centrifugation , endocrinology , biochemistry
Summary: Human germinal cells were isolated using a combined mechanical method and enzymatic digestion of testicular tissue. The attempt to fractionate the testicular cells by centrifugation in the continuous and discontinuous Percoll gradient was undertaken. The homogeneous (100%) fraction of late spermatids and enriched fractions of spermatocytes (up to 60%) and round spermatids (approx. 66%) were obtained. Cell‐binding radioimmunoassay (CB‐RIA) was used to evaluate the HLA expression both on heterogeneous suspensions and enriched fractions of testicular, germ cells using mouse mococlonal antibodies directed to Class I (HLA, ‐A, ‐B, ‐C) and Class II (HLA, ‐DR) determinants of MHC (main histocompatibility complex). Consistently negative results were obtained as well for heterogenous populations of germinal cells as their fractions in respect to both Class I and Class II antigenic determinants of HLA system. Zusammenfassung: Es wurden menschliche Keimzellen isoliert mittels einer mechanischen und enzymatischen Methode. Hierzu wurde Hodengewebe verwandt, das von frisch Verstorbenen stammte bzw. bei Hodenbiopsien entnommen wurde. Dann wurde der Versuch unternommen, die Hodenzellen durch Zentrifugierung zu fraktionieren und zwar mit der kontinuierlichen und diskontinuierlichen Percoll‐Gradienten‐Methode. Es wurden homogene Fraktionen der späten Spermatiden (100%), angereicherte Fraktionen der Spermatocyten (60%) und der runden Spermatiden (66%). Für die Auswertung der HLA‐Expression an heterogenen Suspensionen und angereicherten Fraktionen der Hoden‐Keimzellen wurde ein Zell‐Bindungs‐RIA verwendet mit Benutzung von monoklonalen Mäuseantikörpern, die gerichtet waren gegen Class I (HLA, ‐A, ‐B, ‐C) und Class II (HLA, ‐DR) Determinanten des MHC. Es wurden durchweg negative Ergebnisse erhalten und zwar sowohl für heterogene Keimzell‐Populationen als für ihre Fraktionen hinsichtlich beider Class I und II Antigenen‐Determinanten des HLA‐Systems.