Serological Characteristics of Anti‐A Related to Type of Antibody Protein (7S γ or 19S γ)

Summary Examples of anti‐A were obtained from various subjects: random donors; selected group O and B subjects, before and after the injection of A substance; the mother of an infant severely affected with ABO‐haemolytic disease; and normal newborn infants. Approximately 90% of the random group O sera would haemolyse group A red cells when the ratio of serum: cells was 40:1, and all group O sera tested were haemolytic when the ratio was 200: 1. Approximately 30% of group O sera failed to agglutinate pig group A red cells and these sera were mainly those with a low haemolysin titre when tested against human group A red cells. Selected sera were fractionated on a DEAE‐cellulose column. In many cases elution was carried out only with 2 phosphate buffers, 0.02 M to obtain a fraction containing 7Sγ globulin and 0.2 M to obtain a fraction containing 19Sγ globulin, but in some cases intermediate fractions were obtained. The concentration of 7Sγ and 19Sγ in all fractions was estimated by an immunological method. It was confirmed that anti‐A in group B subjects, before and after stimulation with A substance is predominantly 19Sγ globulin whereas in group O subjects in addition to 19Sγ anti‐A there is often some 7Sγ anti‐A before stimulation and usually considerable 75γ anti‐A after stimulation. The finding of Rockey and Kunkel [17] that considerable amounts of anti‐A may be present in “intermediate” fractions obtained from a DEAE‐cellulose column, that is fractions containing only low concentrations of 7Sγ and 19Sγ globulin, was confirmed. Various serological characteristics of these different fractions were studied: (1) Anti‐A in the 0.2 M fraction (19Sγ) was far more easily neutralized by A substance than the anti‐A in the 0.02 M fraction (7Sγ). (2) Whereas the agglutination produced by the anti‐A in the 0.02 M fraction was greatly enhanced in a medium of serum, compared with saline, agglutination produced by anti‐A in the 0.2 M fraction was not enhanced by serum. (3) Only the anti‐A in the 0.2 M fraction was found to agglutinate A p cells although the anti‐A in the 0.02 M fraction would sensitize A p cells to agglutination by an anti‐7Sγ globulin serum. (4) Anti‐A in the 0.2 M fraction bound more complement than antibody of equivalent titre in the 0.02 M fraction. In all these tests, antibody eluted in intermediate fractions and thought to correspond with the 11‐12S antibody described by Rockey and Kunkel 117] behaved in the same way as 19Sγ anti‐A recovered in the 0.2 M fraction. It is clear that there is no single criterion of “immune” anti‐A; an ability to hacmolyse group A cells readily is possessed by most 19Sγ anti‐A and all 7Sγ anti‐A, whereas the ability of a serum, after partial neutralization, to sensitize A cells to an antiglobulin serum is almost confined to those containing 7Sγ anti‐A. Résumé Des anti‐A ont été obtenus chez différents sujets: des donneurs pris au hasard; des sujets de groupe B ou O avant et après l'injection de substance A; de mères d'enfant atteints gravement de maladies hémolytiques ABO; de nouveaux‐nés normaux. A peu près 90% des sérums de groupe O testés hémolyse les érythrocytes de groupe A lorsque le rapport sérum/érythrocytes est de 40:1 et tous les sérums O testés sont hémolytiques quand le rapport est de 200:1. A peu près 30% des sérums de groupe O sont incapables d'agglutiner les érythrocytes A de porcs et ces sérums sont précisément ceux qui présentent un titre bas d'hémolysines lorsqu'ils sont testés contre les érythrocytes humains de groupe A. Des sérums sélectionnés ont été fractionnés sur colonne de DEAE cellulose. Dans de nombreux cas, l'élution a été pratiquée seulement avec deux tampons phosphate, l'un à 0,02 M pour obtenir une fraction contenant lea 7Sγ globulines, l'autre à 0,2 M pour obtenir la fraction des 19Sγ globulines, mais dans certains cas des fractions intermédiaires ont été obtenues. La concentration des 7 S et des 19 Sγ globulines a été déterminée dans toutes les fractions par une méthode immunologique. II a été. confirmé que l'anti‐A des sujets de groupe B, avant et après stimulation par la substance A, est surtout des 19Sγ globulines, tandis clue chez les sujets de groupe O, avant la stimulation, en plus des 19Sγ anti‐A, il y a souvent un peu de 7Sγ anti‐A, et, d'ordinaire, après la stimulation, une grande quantité de 7Sγ anti‐A. La découverte de Rockey et Kunkel [17] selon laquelle une grande quantité d'anti‐A peut se trouver dans la fraction «intermédiaire» obtenue à partir des colonnes de DEAE cellulose, et, que ce sont des fractions contenant uniquement de faibles concentrations de 7S et 19Sγ globuline est confirmée. Les différentes caractéristiques sérologiques de ces fractions ont été étudiées: (1) L'anti‐A de la fraction 0,2 M (19Sγ) est beaueoup plus facilement neutralisée par la substance A que l'anti‐A de la fraction 0,02 M (7Sγ). (2) Tandis que l'agglutination produite par l'anti‐A de la fraction 0,02 M est fortement favorisée par un milieu sérique, l'agglutination produite par l'anti‐A de la fraction 0,2 M n'est pas favorisée par un milieu sérique. (3) Seul l'anti‐A de la fraction 0,2 M est capable d'agglutiner les érythrocytes A p tandis que l'anti‐A de la fraction 0,02 M sensibilise les érythrocytes A p qui sont ensuite agglutinés par un sérum anti 7Sγ globuline. (4) L'anti‐A de la fraction 0,2 M lie davantage de complément que les anticorps de měme titre de la fraction 0,02 M. Dans tous ces tests, l'anticorps élué a partir de la fraction intermédiaire et que l'on pense correspondre à l'anticorps 11–12 S décrit par Rockey et Kunkel [17] se comporte de la měme manière que l'anti‐A 19Sγ retrouvé dans la fraction 0,2 M. II est clair que ceci n'est pas le seul critère de l'anti‐A «immun»; l'aptitude à hémolyser les érythrocytes de groupe A est l'apanage de presque tous les anti‐A 19 Sγ et de tous les anti‐A 7Sγ, tandis que l'aptitude d'un sérum, après neutralisation partielle, de rendre sensibles des érythrocytes à l'antiglobuline est presque le seul apanage de ceux contenant de l'anti‐A 7Sγ. Zusammenfassung Es wurden Anti‐A‐Seren verschiedener Herkunft beschafft. Diese stammten von Blutspendern, ausgewählten O‐ und B‐Individuen, vor und nach Injektion von A‐Substanz, von normalen Neugeborenen sowie von der Mutter eines Kindes mit schwerem ABO‐Morbus hämolyticus. Ungefähr 90% der O‐Seren hämolysierten A‐Zellen, sofern das Serum‐Zellver‐hältnis 40:1 betrug; bei einem Verhältnis von 200:1 erwiesen sich alle O‐Seren als hämolytisch aktiv. Ca. 30% der O‐Seren vermochten Schweineerythrozyten der Gruppe A nicht zu agglutinieren. Es handelte sich dabei in der überwiegenden Mehrzahl um jene Seren, die gegenüber menschlichen A‐Zellen einen niederen Hämolysintieter aufwiesen. Einige ausgrwählte Seren wurden auf DEAE‐Zellulosekolonnen fraktioniert. In den meisten Fällen wurde die Elution nur mit zwei Phosphatpuffern vorgenommen. Mit dem 0,02 M‐Puffer wurde die Fraktion, welche das 75‐γ‐globulin enthielt, eluiert. Zur Elution der Fraktion, in der das 19S‐γ‐Globulin enthalten war, wurde der 0,2 M‐Puffer verwendet. In einigen Fällen wurden Zwischenfraktionen gewonnen. Der Gehalt der Fraktionen an 7S‐γ‐ und 19S‐γ‐Globulin wurde immunochemisch überprüft. Es bestätigte sich, daβ die Anti‐A‐Antikörper bei B‐Individuen vor und nach der Stimulation mit A‐Substanz vornehmlich den Charakter von 19S‐γ‐Globulinen aufweisen; bei O‐Individuen findet man vor der Stimulation nebst 19S‐Antikörpern auch eine gewisse Menge von 7‐S‐Antikörpern. Nach der Stimulation mit A‐Substanz steigt bei O‐Individuen der Gehalt an 7‐S‐Antikörpern meist stark an. Der Befund von Rockey und Kunkel [17], die beträchtliche Mengen von Anti‐A in Zwischenfraktionen mit geringem 7S‐γ‐ und 19S‐γ‐Globulingehalt gefunden hatten, wurde bestätigt. Die serologischen Eigenschaften dieser Fraktionen wurden untersucht. Dabei zeigte sich folgendes: 1. Die Anti‐A‐Antikörper der 0,2 M‐Fraktion (19Sγ) wurden wesentlich leichter durch A‐Substanz neutralisiert, als diejenigen der 0,02 M‐Fraktion (7S). 2. Die Agglutination der Anti‐A‐Antikörper der 0,02 M‐Fraktion wurde im Serummilieu im Vergleich zum Kochsalzmilieu wesentlich verstärkt; bei den Antikörpern der 0,2 M‐Fraktion blieb dieser Effekt aus. 3. Lediglich die in der 0,2 M‐Fraktion ent‐haltenen Anti‐A‐Antikörper vermochten A p ‐Zellen zu agglutinieren. Die Antikörper der 0,02 M‐Fraktion sensibilisierten A p ‐Zellen, so daβ diese durch Anti‐7S‐γ‐Globulinseren agglutiniert wurden. 4. Die Anti‐A‐Antikörper der 0,2 M‐Fraktion vermochten mehr Komplement zu binden, als titergleiche Antikörper der 0,02 M‐Fraktion. In all diesen Versuchen verhielten sich die in den Zwischenfraktionen enthaltenen Antikörper (11‐12S‐Antikorper van Rockey und Kunkel [17]) wie die in der 0,2 M‐Fraktion enthaltenen 19S‐Antikörper. Es ist klar, daβ es kein verläβliches Einzelkriterium für den «Immuncharakter» van Anti‐A‐Antikörpern gibt. Die meisten 19S‐γ‐Anti‐A‐ und alle 7S‐γ‐Anti‐A‐Antikörper vermögen A‐Zellen zu lysieren. Die Fähigkeit nach partieller Neutralisation A‐Zellen für die Wirkung von Antiglobulinseren zu sensibilisieren, findet sich fast ausschlieβlich bei Seren, die 7S‐Anti‐A‐Antikörper enthalten.