Humanes Siderophilin: Isolierung mittels Rivanol aus Blutplasma und Plasmafraktionen, analytische Bestimmung und Kristallisation

Summary It has been shown [5] that rivanol (2‐ethoxy‐2,9‐diamino‐acridinlactate), is highly suited for isolating the siderophilin (or β 1 ‐metal binding) from human plasma. More detailed data for this preparation are presented, and it is shown, that the method, under suitably adapted conditions, can be applied not only to plasma but to any fraction which contains siderophilin. It takes only three precipitation steps to obtain siderophilin preparations, which will eventually crystallize directly under the conditions given by Inman for fraction IV‐7; if not, a single repetition of the rivanol process will give crystallizable preparations. The iron binding capacity of the preparations was determined. After the first rivanol cycle purities of 60 to 90% were recorded. Crystallized preparations had 99% (±1%) of the theoretical iron binding capacity. Immunochemical experiments did not reveal the presence of proteins other than siderophilin. An improved method for the colorimetric determination of the iron binding capacity of siderophilin preparations is described. Résumé Il a été démontré [5] que le rivanol (lactate de 2‐éthoxy‐2, 9‐diamino‐acridine) est très bien approprié à l'isolement de la sidérophiline (β 1 ‐metal‐binding globulin) à partir de plasma humain. Des données détaillées pour l'exécution de ce procédé sont exposées et il est décrit comment cette méthode, dans des conditions déterminées, peut être appliquée non seulement au plasma, mais à n'importe quelle fraction contenant de la sidérophiline. Trois précipitations seulement sont nécessaires pour obtenir des préparations de sidérophiline qui peuvent éventuellement cristalliser directement dans les conditions décrites par Inman pour la fraction IV‐7; sinon une simple répétition du procédé au rivanol donnera des préparations cristallisables. La capacité de lier le fer des préparations obtenues a été déterminée. Après le premier cycle au rivanol des puretés de 60 à 90% ont été enregistrées. Les préparations cristallisées présentaient le 99% (±1%) de la capacité théorique à lier le fer. Au moyen d'analyses immunologiques la présence de protéines autres que la sidérophiline n'a pu être mise en évidence. Une méthode perfectionnée pour la détermination colorimétrique de la capacité à lier le fer des préparations de sidérophiline est décrite. Zusammenfassung In einer kurzen Mitteilung [5] wurde seinerzeit gezeigt, daß mittels Rivanol (2‐Aethoxy‐6, 9‐diamino‐Acridin‐Lactat) Siderophilin aus humanem Plasma auf einfache Art isoliert werden kann. In der vorliegenden Arbeit werden genauere Angaben über die Präparationstechnik gemacht. Es konnte gezeigt werden, daß die Methode bei entsprechender Anpassung nicht nur auf Plasma, sondern auch auf siderophilinhaltige Fraktionen anwendbar ist. Nach nur drei Fraktionierschritten sind Präparate erhältlich, aus denen unter Umständen schon direkt Siderophilin rein kristallisiert werden kann; allenfalls ergibt sonst eine einfache Umfällung kristallisierbare Präparate. Die Eisenbindungskapazität der Präparate wurde bestimmt. Nach der ersten Rivanolfraktionierung wurden Reinheiten von 60–90% Siderophilin gefunden. Die kristallisierten Präparate hatten eine Reinheit von 99±1%. Die antigenanalytische Reinheit der kristallisierten Präparate wurde immunoelektrophoretisch nachgewiesen. Es wurde eine vereinfachte kolorimetrische Methode zur Bestimmung der Eisenbindungskapazität ausgearbeitet.