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Strukturelle Untersuchung subviraler Partikel durch die Kombination von zellfreier Proteinherstellung mit 110 kHz MAS‐NMR‐Spektroskopie
Author(s) -
David Guillaume,
Fogeron MarieLaure,
Schledorn Maarten,
Montserret Roland,
Haselmann Uta,
Penzel Susanne,
Badillo Aurélie,
Lecoq Lauriane,
André Patrice,
Nassal Michael,
Bartenschlager Ralf,
Meier Beat H.,
Böckmann Anja
Publication year - 2018
Publication title -
angewandte chemie
Language(s) - German
Resource type - Journals
eISSN - 1521-3757
pISSN - 0044-8249
DOI - 10.1002/ange.201712091
Subject(s) - chemistry , microbiology and biotechnology , biology
Virale Membranproteine sind vorrangige Ziele bei der Bekämpfung von Infektionen. Ihre Strukturbestimmung bleibt jedoch eine Herausforderung, sowohl in Bezug auf die Probenvorbereitung als auch auf die Methodologie der Strukturanalyse von Proteinen in einer Lipidmembranumgebung. Zellfreie Proteinherstellung und Festkörper‐NMR‐Spektroskopie sind vielversprechende Ansätze in diesem Zusammenhang, der erstere in Bezug auf das hohe Potenzial, komplexe Proteine in nativer Form herzustellen und der letztere für die Fähigkeit, Proteine in Lipiden analysieren zu können. Wir zeigen hier, dass mg‐Mengen des kleinen Hüllproteins des Enten‐Hepatitis‐B‐Virus (DHBV) mittels zellfreier Herstellung produziert werden können, und dass die Proteine zu subviralen Partikeln zusammenlagern. Protonendetektierte 2D‐NMR‐Spektren, die bei 110 kHz schneller Probenrotation um den magischen Winkel und mit <500 μg Protein aufgenommen wurden, zeigen eine Reihe von isolierten Signalen mit Linienbreiten, die vergleichbar zu denen von Modellmembranproteinen sind. Dies ebnet den Weg für strukturelle Studien dieser komplexen supramolekularen Proteinsysteme, die Homologe eines wichtigen Zielproteins für Arzneimittel in der HBV‐Infektion sind.