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Ein allgemeiner Mechanismus der Photokonvertierung von grün‐zu‐rot fluoreszierenden Proteinen unter blauem und infrarotem Licht reduziert Phototoxität in der Einzelmolekülmikroskopie von lebenden Zellen
Author(s) -
Turkowyd Bartosz,
Balinovic Alexander,
Virant David,
Gölz Carnero Haruko G.,
Caldana Fabienne,
Endesfelder Marc,
Bourgeois Dominique,
Endesfelder Ulrike
Publication year - 2017
Publication title -
angewandte chemie
Language(s) - German
Resource type - Journals
eISSN - 1521-3757
pISSN - 0044-8249
DOI - 10.1002/ange.201702870
Subject(s) - chemistry , microbiology and biotechnology , biology
Photokonversion von fluoreszierenden Proteinen mithilfe von blauem und komplementärem nah‐infraroten Licht, genannt “Primed Conversion” (PC), ist ein kürzlich für Dendra2 entdeckter Mechanismus. Die Kontrolle über die Konformation von Arginin an Position 66 und Threonin an Position 69 fluoreszierender Proteine aus Anthozoa (Proteinfamilien Dendra2, mMaple, Eos, mKikGR, pcDronpa) ermöglicht in allgemeiner Weise PC. Mutationen von Alanin 159 oder Serin 173, die dafür bekannt sind, die Chromophorflexibilität zu beeinflussen und reversibles Photoschalten zu ermöglichen, verhindern PC. Eine verbesserte Photokonversion wurde für pcDronpa‐Varianten mit Asparagin 116 beobachtet. Die reduzierte Phototoxizität bei der Anwendung von PC in der Einzelmolekül‐Mikroskopie von lebenden Zellen wird demonstriert, und es werden Trajektorien der RNA‐Polymerase‐Dynamiken in Escherichia‐coli‐Zellen aufgezeichnet.