Premium
Eine durch Lipid‐Wasser‐Trennung verstärkte FRET‐Sonde zur Detektion der Sauren Sphingomyelinase in lebenden Zellen
Author(s) -
Pinkert Thomas,
Furkert David,
Korte Thomas,
Herrmann Andreas,
Arenz Christoph
Publication year - 2017
Publication title -
angewandte chemie
Language(s) - German
Resource type - Journals
eISSN - 1521-3757
pISSN - 0044-8249
DOI - 10.1002/ange.201611706
Subject(s) - chemistry , sphingomyelin , microbiology and biotechnology , förster resonance energy transfer , fluorescence , membrane , biochemistry , physics , biology , quantum mechanics
Eine Echtzeit‐Beobachtung der Aktivität der Sauren Sphingomyelinase (ASM) ist notwendig zur Aufklärung ihrer Rolle in Lipid‐Signaltransduktionsprozessen. Mithilfe von Phosphorodichloridat‐Chemie gelang die Synthese von fluoreszierenden Phosphosphingolipiden mit der Fähigkeit zum FRET. Diese Sphingomyelin‐Analoga sind Substrate für die rekombinante humane ASM und ermöglichen die Verfolgung der ASM‐Aktivität mittels Fluoreszenzspektroskopie. Inkubation mit Zell‐Lysaten von Wildtyp‐ und Knockout‐Mäusen zeigte eine ausschließliche Spaltung durch ASM. Darüber hinaus nutzten wir systematisch die Umgebungsempfindlichkeit der Fluorophore, um signifikante Zuwächse in der Responsivität zu erzielen. Die dabei angewendeten Konzepte könnten auch für andere zukünftige Lipase‐Sonden zum Einsatz kommen. Eine mikroskopische Abbildung der ASM‐Aktivität in lebenden Zellen wurde mittels Zweiphotonenanregung realisiert.