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Verbesserte Erweiterung des eukaryotischen genetischen Codes für seitenspezifische, hochauflösende Click‐PAINT‐Mikroskopie
Author(s) -
Nikić Ivana,
Estrada Girona Gemma,
Kang Jun Hee,
Paci Giulia,
Mikhaleva Sofya,
Koehler Christine,
Shymanska Nataliia V.,
Ventura Santos Camilla,
Spitz Daniel,
Lemke Edward A.
Publication year - 2016
Publication title -
angewandte chemie
Language(s) - German
Resource type - Journals
eISSN - 1521-3757
pISSN - 0044-8249
DOI - 10.1002/ange.201608284
Subject(s) - chemistry , physics , microbiology and biotechnology , nanotechnology , materials science , biology
Hochauflösende Mikroskopie (SRM) profitiert von der Möglichkeit der Einführung kleiner photostabiler Fluoreszenzmarkierungen in Proteine. Die Erweiterung des genetischen Codes (GCE) erfüllt diese Anforderung, indem sie es ermöglicht, kleine Markierungsstellen in Form einzigartig reaktiver nichtkanonischer Aminosäuren (ncAAs) an beliebigen Stellen im Zielprotein einzubringen. Allerdings limitieren die geringe Effizienz des Einbaus der ncAAs und die hohe Hintergrundfluoreszenz die Anwendung für SRM. Die Änderung der subzellulären Lokalisierung des Pyrrolysin‐basierten GCE‐Systems für Click‐Chemie in Kombination mit der DNA‐PAINT‐Mikroskopie ermöglicht es, sogar in geringen Mengen vorkommende Proteine in Säugerzellen zu visualisieren. Dieser Ansatz verknüpft eine vielseitige, biokompatible und potenziell nicht ausbleichende Markierungsmethode mit einer seitenrestspezifischen Präzision. Darüber hinaus eliminiert unser modifiziertes GCE‐System unspezifische Hintergrundfluoreszenz und erhöht die Expressionsausbeute stark, was auch für eine Verbesserung des Protein‐Engineerings in Eukaryoten mittels GCE von Interesse ist.