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Mechanistische Charakterisierung von zwei Sesquiterpen‐Cyclasen aus dem phytopathogenen Pilz Fusarium fujikuroi
Author(s) -
Burkhardt Immo,
Siemon Thomas,
Henrot Matthias,
Studt Lena,
Rösler Sarah,
Tudzynski Bettina,
Christmann Mathias,
Dickschat Jeroen S.
Publication year - 2016
Publication title -
angewandte chemie
Language(s) - German
Resource type - Journals
eISSN - 1521-3757
pISSN - 0044-8249
DOI - 10.1002/ange.201603782
Subject(s) - chemistry , escherichia coli , microbiology and biotechnology , stereochemistry , biochemistry , biology , gene
Zwei Sesquiterpencyclasen aus Fusarium fujikuroi wurden in Escherichia coli exprimiert und gereinigt. Das erste Enzym war wegen einer kritischen Mutation inaktiv, die Aktivität konnte aber durch Sequenzkorrektur per ortsgerichteter Mutagenese wiederhergestellt werden. Das mutierte Enzym und zwei natürlicherweise funktionale Homologe aus anderen Fusarien konvertierten Farnesyldiphosphat zu Guaia‐6,10(14)‐dien. Das zweite Enzym produzierte Eremophilen. Die absolute Konfiguration von Guaia‐6,10(14)‐dien wurde durch enantioselektive Synthese aufgeklärt, während die des Eremophilens aus dem Vorzeichen der optischen Drehung ableitbar war und derjenigen aus Pflanzen entgegengesetzt ist, aber mit der aus Sorangium cellulosum übereinstimmt. Die Mechanismen beider Terpencyclasen wurden mithilfe diverser 13 C‐ und 2 H‐markierter FPP‐Isotopomere studiert.