Parallele chemische Proteinsynthese auf der Oberfläche zur schnellen Analyse der Phosphoregulierung von SH3‐Domänen

Mangelnde Verfügbarkeit erschwert die Analyse posttranslational modifizierter Proteindomänen, denn rekombinante Methoden vermitteln nur selten die gewünschte Ortsspezifität. Die Totalsynthese ermöglicht zwar eine nahezu vollkommene Kontrolle über posttranslationale und andere Modifikationen, jedoch bleiben chemische Methoden auf kürzere Peptide beschränkt. Zur Lösung dieses Problems präsentieren wir hier eine Methode, die a) Immobilisierung N‐terminaler Thio‐Peptidhydrazide über Hydrazonverknüpfung, b) native chemische Ligation auf der Oberfläche mit selbstgereinigten Peptidthioestern c) radikalisch induzierte Entschwefelung und d) einen oberflächenbasierten Fluoreszenzbindungs‐Assay zur funktionellen Charakterisierung kombiniert. Die Methode wurde zur schnellen Untersuchung von 20 SH3‐Domänen verwendet. Die Analyse lässt schließen, dass Tyrosinphosphorylierung der SH3‐Domänen in Abl‐Kinasen als Schalter fungiert, der sowohl einen Verlust als auch einen Gewinn an Affinität für prolinreiche Liganden induzieren kann.