Vielseitige, effiziente und ortsspezifische Proteinfunktionalisierung durch das Enzym Tubulin‐Tyrosin‐Ligase

Abstract Mit dem so genannten “Tub‐tag labeling” haben wir eine neue chemoenzymatische Methode entwickelt, welche die einfache und schnelle ortsspezifische Modifikation von Proteinen erlaubt. Durch die Uminterpretation rekombinanter Tubulin‐Tyrosin‐Ligase können verschiedene nichtnatürliche und bioorthogonal reaktive Tyrosinderivate in Proteine eingebaut werden, welche mit einer kurzen, vom Tubulin abgeleiteten Peptidsequenz (Tub‐tag) ausgestattet sind. Wie anhand der ortsspezifischen Modifikation von Nanobodies, GFP und Ubiquitin gezeigt, ermöglicht diese neuartige Strategie eine Reihe effizienter, schneller und chemoselektiver Modifikationen am C‐Terminus von sowohl isolierten Proteinen als auch solchen in komplexen Zelllysaten. Somit ergeben sich vielseitige Anwendungen im Bereich der Biochemie, der Zellbiologie und darüber hinaus.