Helligkeit durch lokale Rigidifizierung – LNA‐verstärkte FIT‐Sonden zur bildgebenden Darstellung von Ribonukleotidpartikeln in vivo

Bei der Analyse der RNA‐Dynamik in lebenden Zellen werden üblicherweise transgene Methoden eingesetzt. Diese erfordern modifizierte RNAs und Zellen. Hingegen ermöglichen Hybridisierungs‐Fluoreszenzsonden Untersuchungen an Wildtyp‐Zellen. Wir haben Nuklease‐resistente FIT(“DNA‐forced intercalation”)‐Sonden entwickelt, in denen hohe Anstiege der Fluoreszenz durch Hybridisierung mit einer großen Helligkeit einhergehen, sodass einzelne Ribonukleotidpartikel (RNP) verfolgt werden können. Hierbei dient ein einzelner Thiazolorange(TO)‐Interkalationsfarbstoff als Nukleobasensurrogat während eine benachbarte LNA(“locked nucleic acid”)‐Modifikation die Umgebung konformativ fixiert. Dies schließt Fluoreszenzabklingkanäle und erhöht so die Helligkeit von TO in Sonden‐Ziel‐Komplexen. Zwei FIT‐Sonden reichen aus, um oskar‐RNPs in lebenden Wildtyp‐Oozyten von Drosophila melanogaster zu verfolgen.