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Ein zellpermeables und photospaltbares Reagens für die selektive intrazelluläre Protein‐Protein‐Dimerisierung
Author(s) -
Zimmermann Mirjam,
Cal Ruben,
Janett Elia,
Hoffmann Viktor,
Bochet Christian G.,
Constable Edwin,
Beaufils Florent,
Wymann Matthias P.
Publication year - 2014
Publication title -
angewandte chemie
Language(s) - German
Resource type - Journals
eISSN - 1521-3757
pISSN - 0044-8249
DOI - 10.1002/ange.201310969
Subject(s) - chemistry , stereochemistry
Selektive Dimerisierungsreagentien (CIDs; chemical inducers of dimerization) wurden entwickelt, um die Protein‐Dimerisierung und ‐Translokation chemisch zu steuern. Wir stellen hier ein neues, photospaltbares CID (MeNV‐HaXS) vor, das HaloTag‐ und SNAP‐tag‐Fusionsproteine bindet und eine exzellente Selektivität und intrazelluläre Reaktivität besitzt. Die Anregung bei 360 nm spaltet die Methyl‐6‐nitroveratryl‐Gruppe von MeNV‐HaXS, und das “Dimere”, wieder in die beiden Proteine. MeNV‐HaXS verknüpft HaloTag‐ und SNAP‐tag‐Fusionsproteine und erlaubt ihre zielgerichtete Verschiebung an Membranen und Zellorganellen, z. B. Plasmamembran, Endosomen, Lysosomen, Golgi, Mitochondrien und das Aktin Zytoskeleton. Die photolytische Spaltung von MeNV‐HaXS setzt Zielproteine frei und ermöglicht die optische Manipulation der Proteinlokalisation mit hoher subzellulärer Präzision in Raum und Zeit. MeNV‐HaXS ermöglicht so kinetische Studien, Manipulation der Proteindynamik und der subzellulärer Enzymaktivität. Demonstriert wurde die Anwendung von MeNV‐HaXS für die zielgerichtete Protein‐Translokation an den Golgi und die kinetische Erhebung von Importprozessen in den Zellkern.