N‐terminale Proteinmodifizierung mittels Substrat‐aktivierter Katalyse

Artifizielle Funktionalisierungen von Proteinen stellen sowohl in der angewandten als auch in der Grundlagenforschung ein wichtiges Werkzeug dar und erweisen sich als eine Herausforderung für Proteinchemiker. Aufgrund ihrer nativen Regio‐ und Stereoselektivität bieten enzymatische Proteinmodifizierungen einen attraktiven Ansatz, jedoch ist eine universelle Anwendung durch deren hohe Spezifität beschränkt. Aufgrund der intrinsischen Reversibilität enzymatischer Reaktionen sind Proteinasen prinzipiell in der Lage auch Ligationen zu katalysieren. Dies macht sie zu einem interessanten Werkzeug für spezifische Proteinkonjugationen. Wir berichten über die Entwicklung einer hochspezifischen Trypsinvariante für die selektive N‐terminale Modifizierung von Proteinen. Die Reaktion verläuft mit quantitativen Produktausbeuten unter nativen Bedingungen. Wir zeigen, dass die Variante eine ungeordnete Zymogen‐ähnliche Aktivierungsdomäne aufweist, die in Gegenwart geeigneter Substrate in die aktive Konformation überführt wird.