CONGELAÇÃO DO SÊMEN CANINO COMPARANDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE GLICEROL E DIFERENTES TEMPOS DE EQUILÍBRIO

O objetivo deste trabalho foi estudar a concentracao de glicerol e tempo de equilibrio para congelacao de espermatozoides caninos diluidos em Tris-Gema. Vinte caes serviram como doadores sendo estimulados por massagem peniana. Semanalmente colheu-se a fracao rica semen ate a obtencao de 20 pools (3 ejaculados/pool). Apos a avaliacao macro e microscopica, o pool foi dividido em 4 partes iguais e diluido em amostras de Tris-gema adicionado de 4, 6, 8 e 10% de glicerol respectivamente, pelo metodo “one step”, a temperatura de 37oC. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 ml permanecendo em equilibrio a 4oC por 1, 2, 3 e 4 horas, sendo entao colocadas em vapor de nitrogenio liquido (N2) por 15 minutos e posteriormente mergulhadas e, entao, raqueadas e armazenadas em botijao criobiologico. A descongelacao foi feita a 37 oC por 30 segundos retirando-se uma aliquota para avaliacao da motilidade, vigor e retencao acrossomal; o restante do semen foi incubado em banho Maria a 39 °C por ate 4 horas para teste de termoresistencia (TTR). Os melhores resultados pos-descongelacao de motilidade (P Freezing of canine semen comparing different glycerol concentrations and cooling-off periods Abstract The aim of this study was to evaluate the glicerol concentration and the time of freezing equilibrium for the canine spermatozoa diluted in TRIS-yolk. Twenty dogs served as donors and were stimulated by penis massage. Only the rich fraction of the ejaculated fluid was weekly collected until 20 pools were obtained (3 ejaculates / pool). Following macroscopic and microscopic evaluation, the pool was divided in 4 parts and diluted in different samples of TRIS-yolk extender at 4, 6, 8 and 10% of glycerol concentration respectively, using the “one step” method at 37oC. These samples were packed in 0.5 ml straws and kept for 1, 2, 3 and 4 hours at 4 oC, followed by 15 minutes in nitrogen vapor, then immersed in liquid nitrogen and kept in cryobiologic bottle. The thawing step was carried out for 30 seconds at 37 oC. A semen aliquot was used to evaluate the motility vigor and acrossomal retention and the remaining was incubated in water bath at 39°C up to 4 hours for TTR (test of thermal resistence). The best post-thawing results of motility (P