VARIAÇÃO DE CONCENTRAÇÃO DE PROTEINASE K EM PROTOCOLOS DE EXTRAÇÃO DE DNA DE BOVINO

Os procedimentos padroes para extracao de DNA incluem o tratamento com proteinase k e posterior incubacao em banho-maria por um determinado tempo. Sendo assim, avaliar metodos de extracao de DNA que minimizem a quantidade de proteinase k e o tempo necessario para a realizacao das etapas, em que seja mantida a eficiencia no que tange a quantidade, qualidade e a possibilidade de amplificacao por PCR do DNA extraido, e de extrema importância para os estudos moleculares baseados em acidos nucleicos. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiencia de protocolos de extracao de DNA, variando-se a concentracao de proteinase k e tempo de incubacao em banho-maria. O DNA foi extraido a partir de sangue periferico de bovinos. Para a extracao do DNA genomico, utilizou-se oito protocolos que diferiam em concentracoes de proteinase k (0,04 e 0,08µg mL-1) em intervalos de tempo variados (90, 180, 360 minutos e overnight ). O DNA foi analisado quanto a sua qualidade, quantidade e viabilidade de amplificacao. Foi possivel obter DNA genomico de qualidade, com concentracoes e pureza satisfatorias para amplificacao. Com base nas analises estatisticas, as variacoes no protocolo tiveram efeitos isolados, ou seja, a qualidade do DNA foi suscetivel a concentracao de proteinase k e ao tempo no banho-maria, entretanto a quantidade de DNA das amostras foi suscetivel ao tempo de incubacao em banho-maria, nao tendo interferencia pela concentracao de proteinase k. Apesar dos efeitos isolados, os parâmetros estudados influenciaram de maneira significativa na qualidade e quantidade de DNA.