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Introducción: múltiples investigaciones han demostrado que los estetoscopios se encuentran colonizados por bacterias causantes de infecciones humanas. A pesar de ello, no se han definido las causas por las que estos instrumentos se contaminan. Objetivo: determinar las conductas de higiene que tienen los estudiantes de un programa de medicina de la ciudad de Tunja, Colombia, en el uso de los estetoscopios. Materiales y métodos: se seleccionaron 50 estudiantes de medicina quienes diligenciaron un cuestionario con preguntas cerradas, construido con base en grupos focales que permitieron caracterizar las conductas de uso intra y extrahospitalarias del estetoscopio. Además, a cada estudiante participante se le solicitó su estetoscopio para tomar muestras de cuatro partes del mismo, que posteriormente fueron cultivadas en agar nutritivo y caracterizadas macroscópica y microscópicamente por medio de la coloración de Gram. Resultados: de los 50 estudiantes que diligenciaron el cuestionario se evidenció que el 48% nunca había limpiado el estetoscopio, el 24% lo limpiaba con alcohol antiséptico y el 2% realizaba limpieza antes de la valoración del paciente. En el 100% de los estetoscopios se aislaron colonias bacterianas, principalmente cocos Gram positivos, siendo el diafragma la parte más contaminada de este instrumento. Conclusiones: se determinaron conductas inadecuadas en el uso del estetoscopio a nivel intra y extrahospitalario, así como la falta de información para su adecuada desinfección. Palabras clave: higiene, conducta, estetoscopios, fómites, estudiantes, medicina. Torres-Ballesteros LA, Rodríguez-Sáenz AY, Mendieta-Vergara JA. Conductas de higiene en el uso de estetoscopios de estudiantes de un programa de medicina de la ciudad de Tunja, Colombia. Medicina & Laboratorio 2017; 23: 249-256.