Some of Pathological Aspects of Campylobacter jejuni Isolated from Diarrhoeal Cases in Children

The study aimed to elucidating some pathogenecity factors of Campylobacter jejuni isolated from sever diarrhoeal cases from children at age of less than two years old, due ا رلا دومحم ةريم و يةاطلا ا زرلا دبع ةدات نو 64 to the association between this bacterium and these cases .The factors studied included such its adherence to eucaryotic cells by using oral epithelial cells isolated from human. The bacterium showed ability of adherence on these cells. The ability to produce enterotoxin and its effect through injection intraperitoneally in the mice was also investigated. after three days the mice were killed and histological sections were prepared from small intestine , large intestine and liver .The microscopical results for these sections showed vascular degeneration in the cytoplasm of hepatocytes and lymphocytic perivascular cuffing surrounded the centeral vein , as well as dilatation of the lumen, In small intestine there is atrophy of villi, severe coagulative necrosis in epithelial lining of the mucosal layer and infiltration of inflamentary cells while in large intestine there was elongation of some villi and atrophy in others. Infiltration of inflamentary cells was also noticed. ــ ةمدقملا ةدمومرج هببدست نلدلا ردملا ىعددي Campylobacter jejuni ردمب Campylobacteriosis نودكيو نوحي ام ابلات نللا يةاملا لاهسلاا نم ةماع ةروصب يناعي يرملا نا لاا هيا رعا يف ا رياغتم رملا ال لاهدسا ىدلا رودطتي نا لادمتحاو طادخملا ىدلع ( نودمد Zanbransky, 1997; Black, 1993 ) . ةدلاح رددقتو ردددم وددددح Campylobacteriosis ةبدددسنب ن ةندددس لدددك صخدددش ينوددديلم ةبادددصا ىدددلع دددديزتل 1 يدددف % ( ءاتددشلا لددصف يددف هددنم يددصلا رهددشا يددف ا را رددكت رددمكا رددملا الدد نوددكيو ، ةدددحتملا تادديلاولا Church, 1995 ) ةمومرج نا نم مترلا ىلعو . Campylobacter تودم رددقي هدنا لاا ةماع ةروصب ةافولا ببستلا 100 ( ةندس لدك يدف ةدمومرجلا حلدهب بادصم صخدش Tauxe, 1992 ) تابادصلاا مدظعم نادف ةديةابولا تلاادحلا يدفو ا رددعلاا ةحددياو نوددكت Symptomatic ا رددعلاا ةحددياو ردديت تاباددصلاا اددما Asymptomatic نوددكتف دتعم ادهخانم نودكي يدتلا طادنملا يف ةرشتنم ددحتو لاد نيغلادبلا ددنع تابادصلاا حلد بدلتا تلاادح ءانمتدساب ، نا ددجو ديح يدلاغندب لدمم ةديمانلا لودلا عب يف لافطلاا دنع رملا يشفت 39 رادمعمب لادفطدا ندم % ةددمهملا تلا ادستلا نددم دديدعلا ىددلا دودقي الد و ا رددعلاا ةحدياو رديت مهتابادصا نوددكت نا ندكمي نيتندسلا نود ددف تاددفلاتخلاا لوددح ا تلالاددسلا ةوا رددي ي هددتعانمو يدديملا ةيددساسحو ةددلوزعمل نا نددكمي نلددلا رددملا دددي يدف ا ردكبم بدستكي ةديمانلا لوددلا (Bennett and Plum, 1996) ندع ميما ردجلا حلدهب ةدادع ةبادصها ددحتو . حادديملا برددشو اددديج ةددخوبطملا ردديت وا ةددةينلا نجاودددلا ةددصاخو ةددمعطلااو رتددسبملا ردديت بدديلحلا لواددنت دديرط ةمومرجلا حلهل ةلماحلا تاناويحلا ذم ملاتلا ةطاسوب كللكو ةلماعملا ريت ( Walker et al., 1986 .) ةمومرج دحت C.jejuni لدماوع ةفودصوملا ةديعونلا تاديكيناكيملا عبدل اهكلاتما يرط نع ةباصها يملا حلد ن ندم متردلا ىدلع ةوا ردي دياو لكدشب مدهفت مدل تاديكيناك ةوا رديلا لدماوع مديتو ، ةدددحملا طاودسلاا ددييا ءاددعملال ةدديةلاطلا ادديلاخلا وزددتو ةدديطاخملا ةددقبطلا ىددلع اددصتللااو لدقنتلا ىددلع اهتردددقو ةددكرحلل نلددلاو ا ةيدديا رملاا يددف رودددب موددقي ، نلددلا نوددعملا نافيلددلل ةددمومرجلا حلدد جاددتنا تلجددس ريراددقت كاددن نا نددع لادديف ةموثرجل ةيضرملا بناوجلا ضعب Campylobacter jejuni 65 كلا تامي مس ةيلاعفل هباشم لكشب هلعف ةيكيناكيم تفصو ا ريلو Vibrio cholerae رديغتملا مدسلل اهبش رمكاو ةمومرجل ةرا رحلاب E.coli ( et al., 1994 Suzuki Pancorbo et al., 2001, .) خلل لدتاقلا محتدقملا نافيلدلا و رخا نافيل تنت اهنا نع لايف اديلا ( CDT ) Cytolethal Distending toxin يدبم ادديلاخ يددف ةددةيطب ةدديولخ تا ردديغت زدفحي نلدلا ( ينيددصلا رتددسماهلا CHO ) Chines hamster ovary و HEP-2 ادديلاخو HeLa ةددمومرج لددبق نددم نافيلددلا نيوددكت نا . C. jejuni يددفو دددقعم لكددشب متددي ةفورعم ريت ورظ ( Pikett et al., 1966 ) . ةمومرج ةيم لا ا رظنو C.jejuni ةرودصب لاهدسلاا رادشتنلا ةبدسنو ديددشلا لاهسلاا تلااح ذم اهطابتراو ساو ىلع اهتردق تابما يح نم ةمومرجلا حل ةدسا ردل يلاحلا حبلا ءاج لافطلاا نيب اميسلا انعمتجم يف ةع ك ةاوددددنلا ةدددديقيقح ادددديلاخب اددددصتللاا و ،ناددددسنها مددددفل ةدددديةلاطلا ادددديلاخلا دددديلباق راددددبتخا اددددهجاتنا ة نوددددعملا نافيلددددلل enterotoxin ع ةمجانلا ةيجسنلا تا ريغتلل ةسا رد ءا رجاو رةفلا نقح ن نافيللا الهب ةيربتخملا نا . لمعلا قئا رطو داوملا تعمج 152 ومد لاهساب نيباصم لافطا نم جورخ ةنيع نم نيتنسلا نود رامعابو يةامو ن ىفشتسم تلدخا. لدصوملا ةنيدم يف لافطلال ريملاا نبا ىفشتسمو لافطلااو ةدلاولل ءاسنخلا ىفشتسمو يميلعتلا نزا رلا تعديوو تادنيعلا حلد ندم تاحدسم نرادك لدقانلا طددسولا يدف رديلب Cary-blair transport medium نيدحل تخملا ىدلا لودصولا يبادختنلاا طددسولا ىدلع تدعرز مدم ردب Preston Campylobacter blood free medium يكنوكاملا طسو ىلع اهعرز ىلا ةفايلااب نيجدسكودا ةليلق ورظ يف تنيحو يدفو 42 o ةددمل م 72-48 صيخددددشت مددددتو ةعاددددس تاددددصوحفلا ءا رددددج او ةدددديرهجملاو ةدددديعرزملا صةاددددصخلا ىددددلع اداددددمتعا ةددددمومرجلا حلدددد صاخلا ةيصيخشتلا ةيويحوميكلا نوعملا نافيللا نع شكلاو اصتللاا رابتخا نرجا مم اهب ة . قاصتللاا رابتخا Adherence Test : ه ةددددمومرج ةيدددديا رما تاددددبم C.jejuni ددددطخلا عي نلددددلا( اددددصتللاا راددددبتخا ءا رددددجا مددددت ا ةو يددددف ىددددلولا بلطتي نللاو )ةي ا رملاا : مظنددملا تافدسوفلا لودلحم (PBS) Phosphate Buffer solution (Cruickshank et al., 1975) ةغبص ا زمك Giemsa stain ( Gurr, 1962 .) ةديةلاطلا اديلاخلا لزدع Epithelial cells صاخدشا مدف ندم ةيفدشرحلا ةديةلاطلا اديلاخلا ىدلع لودصحلا مدت : احصا بديبانا ىدلا ةرشابم لقنت ةمقعم ةينطق تاحسام مادختسا للاخ نم ةيومف تاباصا ناب نيباصم ريت ء ف رمغتل ةمقعم مدقعملا مظندملا تافدسوفلا لولحم ي PBS دب ةيديماح ةدلا 7 ةيفدشرحلا اديلاخلا لدست متدي ا ددعب لودلحمب PBS عردسب نزدكرملا دردطلا زادهج مادختدساب ة 5000 ةردشع ةددمل ةدقيقد / ةرود تا ردم لامدلو ةادقد لولحمب ةيةلاطلا ايلاخلا ىلع نواحلا بسا رلا يلعت مت. PBS ذيو رغل يشرت ةقروب شري يح مظنملا ا رلا دومحم ةريم و يةاطلا ا زرلا دبع ةدات نو 66 طدس ىدلع ءادطغلا طغدي ةطاسوب ةيجاجز ةحيرش ءاطت ىلا ايلاخلا لقن متيل اهحطس ىلع ةيةلاطلا ايلاخلا ( جتل كرتت مم يشرتلا ةقرو Ofek et al., 1986 ) . ي حت يمومرجلا لعملا ر Preparation of bacterial suspension : بددلقلا ذدديقن طددسو يددقلت مددت – خددملا Brain Heart Infusion Broth (BHI) ةددمومرجب C. jejuni يف نيجسكودا ةليلق ورظ يف تنيحو 37 ةدمل م 24 يمودمرجلا لعملا نم يفاخت ري حت متو ةعاس لودلحم مادختدساب PBS ديكرتلا لدخاو نيز CFU 10 مدس/ 3 و CFU 10 مدس/ 3 ديح ادصتللاا ةدبرجت ءا ردجه زيكرتلا نيل ح ابطلااب علا ةقيرط مادختساب ني Plate count method ( 1975 et al., Cruickshank ءادطت ىدلع ةديةلاطلا اديلاخلا تديبمت مدتو.) ةحيردشلا نردتب دبط يدف ءادطغلا ذديوو ةقبادسلا ةردقفلا يف درو امك ةيجاجزلا ( هديلإ يدي و مدقعمو ديظن 5 مدس ) 3 ندم ريحملا ميما رجلا لعم ددنع ةندياحلا يدف يمودمرجلا دلعملا ذدم ةيةلاطلا ايلاخلا ىلع نواحلا بطلا ذيو ، 37 لودددلحمب ةحيردددشلا ءادددطت لدددست مدددت ،ةددددحاو ةعادددس ةددددمل م PBS ةقدددصتلملا رددديت ميما ردددجلا ةدددلا زه كدددللو لاطلا ادديلاخلا تدديبمت مدتو ،ةدديةلاطلا اديلاخلاب ب ةدية ةددمل لوناددميملا لامعتددسا 15 ا زددمك ةغبددص تفيديا مددم ،ةددقيقد زيكرتب 30 ةددمل % 20 ب ءادطغلا ندع ةغبدصلا تدليز ا ددعب ،ةدقيقد ءاوهلادب دجتل تدكرتو ردطقملا ءادملا تدبم ، رهجملاب صحفلل ةز اج تتو بولقم ذيوب ةيجاجزلا ةحيرشلا ىلع ءاطغلا يةويلا ( et al., 1980 Van-Den Bosch ) . تخا نافيذلا نع فشكلا راب يوعملا Detection of Enterotoxin test : ( يف درو امك نوعملا نافيللا نع شكلا رابتخا نرجا et al., 2001 Pancorbo للادخ ندم ) دختدسا ما ذيباس ذبر رمعب ءاييب نا رةف ةدعومجملا تددع تاناويح لام ةعومجم لك تمي نيتعومجم ىلا تمسقو ، و ةرطيددس ةددعومجم ىددلودا رددجا يددتلا نا رددةفلا ةدديناملا ةددعومجملا تنمدديت نوددعملا نافيلددلا نددع دشكلا اددهيلع ن ، ةمومرج تلازع تمدختساو C.jejuni جادتنا ىدلع اهترددق مددع و اهترددق ىدلع للادتدسلال دحبلا يدف ةلوزعملا نوعملا نافيللا Enterotoxin كودا ةدليلق ورظ يف مدلا راك طسو ىلع اهعرزب تلازعلا طيشنت متو ، نيجدس ةدددمل 24 يجولويددسفلا لوددلحملا يددف ميما رددجلا دديلعت مددت ا دددعب ةعاددس PBS نزددكرملا درطلاددب تلددست مددم مددتو ، زيكرتلا ىلع لوصحلا CFU 10 مس / 3 يف PBS . نوعملا نافيللا جاتنهو ع حلادع يدف ةرديحملا تلازدعلا ةديمنت مدت دقف ، ردم طدسو ىدل Casamino acid yeast extract broth ت تنديح ديح ادهجب يمودمرجلا دلعملا بدسر ،حلادع ةروكلدملا وردظلا دفن تدح ز ةكرش نم دربملا نزكرملا درطلا High Speed 18 MSE England يدف g 800 ةددمل 20 ةدقيقد دشا رلا لدخ . ( ةحشرم ةقرو للاخ شرو Millipore filter اهبوقم راطقا ايق ) 0.22 ةمقعم ينانق يف ذمجو رتيموركيام امعتسلا حل يف هل ةبرجتلا . ةموثرجل ةيضرملا بناوجلا ضعب Campylobacter jejuni 67 ددددب ةددديناملا ةدددعومجملا نا ردددةف تدددنقح 0.1 مدددس 3 نودددعملا نافيلدددلا ندددم intraperitoneally نا ردددةف تدددنقحو دب ةرطيسلا 0.1 مس 3 لولحم نم PBS ءا ردجا مدتو مروفورولكلادب نا ردةفلا تدلتق نقحلا نم مايا ةملام رورم دعبو لدك ردمت ددعب تددجو نا ةيديرملا تا رديغتلا ةظحلامل ةيحيرشتلا ةفصلا ةدظيلغلا ءادعملااو ةدقيقدلا ءادعملاا ندم لداددعتملا رادددلا نيلاددمروفلا لوددلحم يددف دددبكلاو 10 كمددسب ةيجددسن ذطاددقم ريدديحتل % 4 6 نوركياددم ا دددعب نيلدددسكوتاميهلا تغبدددصب تغبدددص – نداددديتعلاا يةوددديلا رهجملادددب اهدددصحف ردددغل نيدددسويا تافدددصلا دددديدحتو تدجو نا ةيجسنلا ةي رملا ( Whitehead et al., 1972 ) .