Inhibitor Effect Physiology of Some Purine Analogs on Metabolism of Leishmania major Promastigotes

The capacity of purine analogues (pyrazolo (3,4-d) pyrimidine, pyrazolo (4,3-d) pyrimidine and deazapurine) to inhibit Leishmania major promastigotes metabolism was evaluated. نورخآو نسح لضاف نيسح 18 The observations reported here indicate that APP, HPP, FoA and FoB inhibited the synthesis of RNA, DNA and the activities of adenine phosphoribosyltransferase and adenosine kinase in promastigotes of L. major. It has been postulated that Leishmania promastigotes have a unique ability to convert these analogs sequentially to their nucleoside triphosphates leading to their incorporation into RNA and cytotoxicity to the organism. ةمدقملا شللا سنج لمشي ةيومدلا ةيطوسلا تايليفطلا اينام Haemoflagellates مسـجلا دوـجوب زيمتت يتلا تاينامشللا ءادب ةيلك فرعت ناسنلإا يف ةمهم اضارمأ ببستو طوسلا ةدعاق دنع يكرحلا Leishmaniasis ملا يف تسلاا هبشو ةيئاوتسلاا قطان ةيئاو (Herwaldt, 1999) رازألااكلا ببست ذإ ) يوشحلا اينامشللا ءاد ( visceral leishmaniasis) Kala azar ( ةيقرشــ ـلا ةرــ ـثبلاو ) يدــ ـلجلا اينامشــ ـللا ءاد ( Oriental sore (cutaneous leishmaniasis) ـ نلأاو مفلا يف ةيطاخملا ةيشغلأا لكآتو ف ) اينامشـللا ءاد يطاخملا يدلجلا ( Espundia ( mucocutaneous leishmaniasis) . مي ك لأا ةجلاعمب ضارملأا هذه ةحفاكم ن اينامشلل ةداضملا ةيودلأاب صاخش ا نمضتت امك ، تاوـطخل تلاقانلا ةحفاكم ةيئاقولا vectors ىودعلا تانزاخو reservoir hosts كلذ ىلإ ةفاضلإاب نيصـحتلا نإـف لاعفلا immunization يف هحاجن نهربي نأ نكمي لبقتسملا (Hide et al., 1997) . ايميكلا جلاعلل ةبسنلاب امأ ؤفاكتلا يسامخ نوميتنلأا دعيف يئ pentavalent antimony ماتـسوتنب لثم pentostam (sodium stibogluconate) يدـلجلاو يئاشـحلاا اينامشللا ءادب نيباصملل لضفلأا جلاعلا اهرادقم ةيموي ةعرجب ىطعيو 20 مغلم / زو نـم مغك لا ةدـمل مسـجلا ن اـموي نيرشـع نـع لـقت (Berman, 1992; Davidson, 1998) . ميزـنإ هطيبثتل ةجيتن اهنأب دقتعيف ءاودلا اذه لمع ةيكيناكيم امأ يئاوـهلالا لـيثمتلا ةـيلمع يف زوكولكلا زيكرت ديدحت ىلع ميزنلإا اذه دعاسي ثيح زينياكوتكرفوفسوفلا يتلاو زوكولكلل ب اينامشللا يف ثدحت ةـيلاع تلادعم (Glew et al., 1988; Ronsenblatt, 1999) . اـمك مدختسا ؤفاكتلا يسامخ ينوميتنلأا بكرملا glucontime تاينامشـللا ءاد نـم ةدـيدع عاونأ جلاع يف (Herwaldt, 1999) ؤفاــ كتلا يــ سامخ جلاــ عل نيبيجتســ ملا رــ يغ ىــ ضرملل ةبســ نلابو (Mebrahtu et al., 1989) نيديماتنبلا مدختسي Pentamidiene نيسيرتوفملأا وأ Amphotericin B) B ( ا ىطعيف جلاعلل ايناث اطخ اهرادقم ةعرجب نيديماتنبل 4 مغلم / ايعوبـسأ تارم ثلاث مسجلا نزو نم مغك ةدمل 25 فملأا امأ ، ةلاحلا ةباجتسا ىدمل اعبت رثكأ وأ اعوبسأ نيسيرتو B اهرادـقم ةعرجب ايموي ىطعيف 0.5 – 1 مغلم / زو نم مغك ةدمل مسجلا ن 8 عيباسأ (Blana et al., 1998; Lira et al., 1999) . ا نأ دجو دقل نيوكت طيبثت ىلع لمعي نيديماتنبل polyamine synthesis يليفطلا توم ىلإ يدؤي امم (Goldsmith, 1999) . امأ نيسيرتوفملأا B تلاوريتس عم ةرشابم لعافتي هنأب دجو دقف sterols ءاشغلا نيرويبلا تارظانتم ضعبل يطيبثتلا ريثأتلا ةجلسف 19 و يمزلابلا ءاشـغلا ةـيذافن يـف رثؤـت ةدـقعم تاـبكرم جتـني ةـيلخلا لـلحت ىـلإ يدؤـي اـمم (Berman and Dietz, 1999) . مادختـ سا ىرـ ج اـ مك نيروـ يبلا تارظاـ نتم ) نيدـ يميريبولوزاريابلا ( purine analogues ) pyrazolopyrimidine ( ضرــ م جلاــ عل اينامشــ للا ) Hassan, 1993 ( و تاــ بكرم نمضــ تت م نيديميريبولوزاريابلا اهتاديسويلكوين وأ ةينيرويبلا دعاوقلل ايبيكرت ةهباشملا تابكرملا نم ةعومج فلتختو نيجورتنلا تارذ بيترت يف لا ، عقوملا دنع نوبراكلاو نيجورديه 7 ، 8 ، 9 ةسـناجتملا رـيغ ةـقلحلا يف ورتنلا ةدعاقلل عقوملا دنع وأ ةينيج 2 ، 3 ركسلل . ك تمدختسا يتلا تارظانتملا هذه نم داضم ةيودأ مارولأاو ميثارجلل ة ) Jacob, 1987; Holory et al., 1988 ( نيبسيدروكلا بكرم ةيليفطلا ناديدلاو يلاولأاو Cordycepin وأ 3-deoxyadenosine يذلا رذب ليسكورديهلا ةعومجم هيف لدبتست عـقوملا دـنع نيجورديهلا ة 3 ركسـلل نيديـسربويتلا بـكرمو ، Tubercidin نلا ةرذ هيف لدبتست يذلا رت عقوملا دنع نوبراكلا ةرذب نيجو 7 أ نيـسام روـفلا يبكرمو ، Formycin A ب نيسامروفلا وأ Formycin B عـقوملا دنع نوبراكلا ةرذ امهيف لدبتست ناذللا 8 ةرذو عقوملا دنع نيجورتنلا 9 ورتنلا ةرذب يلاوتلا ىلع ،نوبراكلا ةرذو نيج لوـنيرويبوللأا بـكرم كلذـكو ، Allopurinol يذلا عقوملا نم نيجورتنلا ةرذ هيف لوحتت 7 عـقوملا ىـلإ 8 ) ـ لا لكش 1 ( بـكرمو 8 نينيدأازا 8-azaadenine عـقوملا يـف نيجورـتنلا ةرذ هيف فاضت يذلا 8 ) Hassan and Coombs, 1986 ( . نيدـيميريبولوزاريابلل يمسـلا لعفلا نأ ىلإ ةيليفطلا يلاولأا يف تاساردلا نم ديدعلا تراشأ دقل ا نع جتان نيـسونيلإل ةـيبيكرتلا تارظانتملا ىلإ اهليوحتو ذاقنلإا راسم لبق نم تارظانتملا هذه مادختس يف جمدنت مث تيفسوفلا يداحأ نيسونيدلأل ةيبيكرتلا تارظانتملا ىلإ دعب اميف لوحتت يتلا تيفسوفلا يداحأ عم لخادتتو يموسوبيارلا يوونلا ضماحلا لسارملا يزوبيارلا يوونلا ضماحلا mRNA ءانبل رفشي يذلا ةـيويحلا تائيزجلا هذه ءانبل ةيتايحلا تايلمعلا يف ىضوفلا عقت اذكهو نيتوربلا ) Nelson et al., 1979; Avila et al., 1986; Hassan, 1993 .( ريثات ةسارد ىلا يلاحلا ثحبلا فدهيو لا ةـيمك ىـلع وـمنلل ةطبثملا نيرويبلا تاقتشم نيتورـب اهيعونب ةيوونلا ضامحلأاو DNA و RNA ةـلماعملا اينامشللا يف و تاـميزنإ ةـيلاعف نـع فشـكلا ةلماعملا اينامشللا يف زيرفسنارت ليسوبياروفسوف نينيدلأاو زينياك نيسونيدلأاو زينيمأ يد نيسونيدلأا نـم لجا جاتنتسا تاراسملا تاقتشم اهكلست يتلا ةيضيلأا ةيدلجلا اينامشللا يف نيرويبلا . نورخآو نسح لضاف نيسح 20 لا لكش 1 : شم ضعب نيديميريبولوزاريابلا تاقت . لمعلا قئارطو داوملا ةمدختسملا تانئاكلا : ةيدلجلا اينامشللا يليفطل طوسلا يمامأ روطلا ىلع لوصحلا مت Leishmania major ةيلك نم نيب نيرهنلا ـ يخشت متو ةيلحم تلازع نم تذخأ دق تناك يتلاو دادغب يف ةيبطلا تارظاـنتملا ةـقيرطب اهص ةيميزنلإا Isoenzymeenzyme analogues ) Al-Jeboori and Evans, 1980 .( امشللا تايليفط تابنتسا روطلا يئانث يعرزلا طسولا يف اين : روطلا يئانث يعرزلا طسولا مدختسا Tobie s medium (Tobie et al., 1950) ىـلع لوصـحلل سلا يمامأ روطلل ةديج ةيمنت ريصق تقو يف اينامشللا يليفطل طو . اذه نوكتي ولا ،نيروط نم يعرزلا طس بلصلا روطلا solid phase لئاسلا روطلاو liquid phase ) Chang and Hendricks, 1985 .( يعرزلا طسولا نم اينامشللا عمج : عون دربملا ةذبنملا زاهج مادختساب روطلا يئانث طوسلا يمامأ روطلا لصف مت Ultracentrifuge 18 MES ةعرسبو (2000 g) ةدملو 10 ئاقد ق ق لسغ مت كلذ دعب ، لوـلحم يف نيترم تايليفطلا صر Tris– HCL زيكرتب 50 رلوـميللم Mm اـحلا زـيكرتب زوركسـلا ىـلع يو 0.25 رلوـم M سأ ةـلادو ينيجورديه (pH 7.2) يعرزلا طسولا اياقب نم صلختلل . نيرويبلا تارظانتم ضعبل يطيبثتلا ريثأتلا ةجلسف 21 ايلاخلا صلختسم ريضحت : سغو عمج دعب لولحم يف اهريسكت مت اينامشللا ل TSD رـت ىـلع يواحلا س HCL زـيكرتب 50 تب زوركسلاو رلوميللم زيكر 0.25 لوتيرثوياثيادلاو رلوم Dithiothritol زيكرتب 0.1 سأ ةـلادبو رلوـم ينيجورديه (pH 7.2) عقاوب 10 ةيلخ / ةيلاتتم تارم ثلاث ةيتوصلا قوف تاجوملا ىلإ اهضيرعتب رتليللم ةدمل 30 ةدمل راظتنا تارتف اهللختت ةيناث 20 اب ةيناث دختس زاهج ما (Soniper 150) ةـلتك ىـلإ اهليوحتل ةسناجتم ) ماخ صلختسم ( ) crude homogenate or crude extract ( ماـخلا صلختسـملا ذـخأ اه دعب ، لا نع بسارلا لصفو ةعرسبو ةذبنملا زاهج ةطساوب حشار 10000 x g ةدمل ةرارح ةجردبو ةدحاو ةعاس 4 ةيوئم . عف نع فشكلل اردصم حشارلا مدختسا دقو يلا براجتلا ميماصت بسحو تاميزنلإا ة . تاقتشم عم ةلماعملا تايليفطلا صلختسم ريضحت تانيرويبلا رئاظن : زـيكرتلا دـيدحتو نيديميريبولوزاريابلا تاقتشمب اينامشللا يليفطل طوسلا يمامأ روطلا ةلماعم دعب لتاقلا ) 50 (% منت قيرط نع كلذو ةلماعملا تايليفطلا ريضحت مت ،ايلاخلا نم يـف يبوـت طسو ىلع اهتي ةعس ةيجاجز قراود 500 مس 3 عقاوبو 100 مس 3 و بلصلا 40 مس 3 قرود لكل لئاسلا طسولا نم فيـضأ ، ـل طبثملا زيكرتلا قرود لكل 50 % قراودـلا تحقل مث نمو نيديميريبولوزاريابلا تاقتشم نم ومنلا نم ـب 0.5 مس 3 سلا يمامأ روطلا ةعرزم نم ىلع ةيواحلا طو 5x10 ةيلخ / مس 3 . يماـمأ روـطلا عـمج مت دعب طوسلا 4 5 طلا سفنب ايلاخلا صلختسم ريضحت ةيلمع تلمكأ مث ةلماعملا نم مايأ يـف ةروكذملا ةقير ةقباسلا ةرقفلا . لأا ةيمك ديدحت ايلاخلا صلختسم يف ةيوونلا ضامح : تشـمب ةـلماعملا اينامشـللا اـيلاخ نم ةيوونلا ضامحلأا ىلع يواحلا صلختسملا ريضحت مت تاق ريابلا ةقيرط مادختساب نييدييميريبولوزا (Burton, 1967) زـيكارت تددـحو ، DNA مب و ةـقيرط بـج ) Giles and Mayer, 1965 ( ك ريدقتب كلذو نـم يزوـبيار يسـكوأ يدلا ركسلا ةيم DNA مادختـساب لينيفلا يئانث نيملأا فشاكلا Diphenyl amine يسايقلا ىنحنملا ىلع دامتعلااب ) لا لكش 2 ( ملا نم رضح ـلا نم زيكارت DNA لا لوجعلل ةيرتعصلا ةدغلا نم صلختسم calf thymus جزم مت ثيح 1 نم رتليللم نم هاوتحم سايق دارملا لولحملا DNA عم 2 فلا يئانث نيملأا فشاك نم رتليللم ةدـمل جيزملا يلغ مث لين 12 ةقيقد يجوملا لوطلا ىلع ةيئوضلا ةفاثكلا تسيق كلذ دعب ، 595 تيمونان نم فشاوكلا ءفك رضحو ر شاكلا ةفاضإ ىلإ ف 1 رطقملا ءاملا نم رتليللم . نورخآو نسح لضاف نيسح 22 لا لكش 2 : يزوبيار يسكوا يدلا يوونلا ضماحلل يسايقلا ىنحنملا ) DNA ( يوونلا ضماحلا زيكرت ديدحت RNA : ـلا زيكارت ديدحت مت RNA رط بجومب ةقي (Plumer, 1978) اذـهو لونيسرولأا فشاك مادختساب ابتخلاا يسامخلا تايركسلل ماع لعافت وه ر لاروفروفلا نيوكت ىلع دمتعي ذإ ة furfural نـم جتـني يذلا فـشاك عـم لاروـفروفلا لـعافتي مـث زكرملا كيرولكورديهلا ضماح عم ةيسامخلا تايركسلا نيخست كيديدحلا ديرولك دوجوب لونيسروأ رضخلأا ءوضلا يطعيل دعاسم لماعك . ـ ـلا ةيمك تددح دقو RNA متعا دا نم رضحملا يسايقلا ىنحنملا ىلع ا RNA يسايقلا ) لا لكش 3 ( نيـب تـحوارت زيكارتب ) 0 – 50 ( مارغوركيام / جزم مت ثيحب رتليللم 2 م رتليللم نم هاوتحم سايق دارملا لولحملا ن RNA عم 3 نم رتليللم ةدمل يلغلا عم لونيسروأ فشاك 20 لا ىلع ةيئوضلا ةفاثكلا تسيقو لولحملا درب مث ةقيقد يجوـملا لوط 660 شاكلا ةفاضلإ فشاوكلا ءفك رضحو رتيمونان ىلإ ف 2 رطقملا ءاملا نم رتليللم . نيتوربلا زيكرت سايق : ةقيرط تمدختسا (Lowery et al., 1951) اينامشـللا تاـيليفط ايلاخل ينيتوربلا ىوتحملا ديدحتل لا مادختساب نيديميريبولوزاريابلا تاقتشمب ةلماعملاريغو ةلماعملا نلوف فشاك Folin ciocalteu reagent . سايقلا ىنحنملا نم ينيتوربلا ىوتحملا جرختسا دقو يرـقبلا لصملا نيموبلأ لامعتساب ي Bovine serum albumin م زيكارتبو ةيسايق ةينيتورب ةدامك ةفلتخ ) لا لكش 4 .( نيرويبلا تارظانتم ضعبل يطيبثتلا ريثأتلا ةجلسف 23 لا لكش 3 : يزوبيارلا يوونلا ضماحلل يسايقلا ىنحنملا ) RNA ( لا لكش 4 : ا نيتوربلل يسايقلا ىنحنمل او زينياـك نيسونيدلأاو زيينيمأ يد نيسونيدلأا تامبزنإ ةيلاعف نع فشكلا ليـسوبياروفسوف نيـنيدلأ زيرفسنارت : زـيينيمأ يد نيـسونيدلأا تاميزنإ ةيلاعف نع فشكلل تممص يتلا براجتلا عيمج يف adenosine deaminase زينياك نيسونيدلأاو adenosine kinase او لأ زيرفسـنارت ليـسوبياروفسوف نينيد adenine phosphoribosyl transferase مجحبو لعافتلا طسو نضح مت 1 ةرارـح ةجردب يئام مامح يف رتليللم 37 ةدمل م 3 نلإا لعافتلا أدب دقو قئاقد ميزـنلإا ةفاضإ درجمب يميز . يـف رـيغتلا لدـعم ردـق دـقو نورخآو نسح لضاف نيسح 24 إ ساسلأا ةداملا ليوحت نع ةجتانلا ةيصاصتملاا ةداملا ىل يئوضلا فايطملا ماد