APPROACHES TO THE DEVELOPMENT OF BIOANALYTICAL METHODS FOR DETERMINATION OF UNSTABLE SUBSTANCES IN BIOLOGICAL FLUIDS

В статье приведены подходы к разработке биоаналитических методик для определения веществ, содержащих в структуре нестабильные функциональные группы. Процессы окисления и гидролиза являются основными причинами разложения веществ в биологических жидкостях. В качестве примера легкоокисляющихся соединений были выбраны молекулы, содержащие в структуре фенольные гидроксилы, в качестве примера легкоокисляющихся соединений – глюкурониды лекарственных веществ. Для измерения концентраций микофеноловой кислоты, содержащей в структуре один фенольный гидроксил и в процессе метаболизма образующей глюкурониды, в плазме крови использовались методы высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим и тандемным масс-спектрометрическим детектированием. Концентрации метилдопы, содержащей в структуре два фенольных гидроксила, в плазме измерялись с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием в диапазоне 0,02–3,00 мкг/мл. Определение деметилированной мебевериновой кислоты, содержащей в структуре один фенольный гидроксил и метаболизирующейся с образованием фенольного глюкуронида, осуществляли в диапазоне 10–2000 нг/мл совместно с мебевериновой кислотой. В начале разработки методик была изучено влияние фрагментации глюкуронидов в источнике ионов на количественное определение изучаемых веществ. Затем был произведён выбор антикоагулянта на основании изучения краткосрочной стабильности и стабильности при замораживании/размораживании аналитов, а также обратной конверсии их глюкуроновых коньюгатов. Для стабилизации метилдопы была использована комбинация антикоагулянта К3ЭДТА и раствора антиоксиданта, содержащего смесь аскорбиновой кислоты, натрия сульфита и натрия гидрокарбоната в концентрациях 5,0 %, 0,2 % и 2,4 % соответственно.