Remodelamento metabólico de Paracoccidioides lutzii durante a privação de cobre determinado por análises proteômicas

xvi 1.INTRODUÇÃO 17 1.1 FUNGO PATOGÊNICO PARACOCCIDIOIDES SPP. 17 1.2 PARACOCCIDIOIDOMICOSE – PCM 21 1.3 O MICRONUTRIENTE COBRE 25 1.4 HOMEOSTASE DO COBRE 27 1.5 PROTEÔMICA 35 1.6 ANÁLISE PROTEÔMICA DE FUNGOS PATOGÊNICOS HUMANOS 37 2. JUSTIFICATIVA 40 3. OBJETIVOS 42 4. MATERIAIS E MÉTODOS 43 4.1 ISOLADO E MANUTENÇÃO DE PARACOCCIDIOIDES 43 4.2 CULTIVO DO FUNGO EM CONDIÇÕES DE PRIVAÇÃO DE COBRE 43 4.3 EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS CITOPLASMÁTICAS E PREPARAÇÃO DO EXTRATO PROTEICO ... 43 4.4 VIABILIDADE CELULAR SOB CONDIÇÕES DE PRIVAÇÃO DE COBRE 44 4.5 ELETROFORESE BIDIMENSIONAL DE PROTEÍNAS (2-DE) E COLORAÇÃO DOS GÉIS 44 4.6 AQUISIÇÃO E ANÁLISE DAS IMAGENS 46 4.7 ANÁLISES ESTATÍSTICAS 48 4.8 DIGESTÃO DAS PROTEÍNAS PARA ESPECTROMETRIA DE MASSA TIPO MALDI 48 4.9 IDENTIFICAÇÃO DAS PROTEÍNAS POR PMF E POR MS/MS E PESQUISA EM BANCO DE DADOS 49 4.10 PREPARAÇÃO E DIGESTÃO DAS AMOSTRAS PROTEICAS PARA NANO-ESI-UPLC-MS E .... 50