Modulação do inflamassoma por componentes de cápsula secretados pelo Cryptococcus neoformans

12 INTRODUCAO 13 Infeccoes Fungicas e Criptococose 13 Fatores de Virulencia e a Capsula Polissacaridica de C. neoformans 19 Receptores da Imunidade Inata e Interacoes com o C. neoformans 22 Inflamassoma e seus Receptores 27 O Papel do Inflamassoma NLRP3 em Infeccoes Fungicas 31 OBJETIVOS 34 Geral 34 Especificos 34 METODOLOGIA 35 Animais 35 Cryptococcus neoformans 35 Obtencao dos Macrofagos 35 Obtencao do Meio Condicionado Bruto 37 Fracionamento do Meio Condicionado 38 Ensaios de Interacao com Meio Condicionado 39 Deteccao da Internalizacao de GXM por Microscopia Confocal 40 Dosagem de IL-1β, proIL-1β e TNF-α por ELISA 41 Dosagem de LDH 41 Deteccao de Caspase-1 Ativa por Citometria de Fluxo 42 Ensaio de Fagocitose e Morte 44 Ensaio de Resistencia ao pH 45 Ensaio de Atividade Fungicida com Transwell 46 Analise Estatistica 47 RESULTADOS 48 Componentes capsulares secretados pelo C. neoformans sao capazes de inibir a producao de IL-1β em macrofagos primados, porem nao a de TNF-α 48 Moleculas responsaveis pela inibicao da producao de IL-1β sao pequenas e polares 49