Incorporación química de la sonda fluorescente FlAsH en la proteína Hha: aplicación al estudio del complejo Hha/H-NS

El objetivo de esta investigacion fue realizar estudios de incorporacion de la sonda FlAsH como posible herramienta para el estudio in vitro e in vivo de la proteina Hha y de su interaccion con H-NS. Se construyo una proteina con la secuencia especifica “CCPGCC” capaz de unir la sonda fluorescente FlAsH; posteriormente se desarrollaron procesos de transformacion, expresion y purificacion, con los cuales se evidencio que a pesar de introducir una secuencia adicional no nativa a la proteina, se pudo obtener proteina en buena cantidad, estabilidad, rendimiento y con un alto nivel de pureza. La optimizacion del protocolo de incorporacion del FlAsH se hizo teniendo en cuenta el rendimiento y el tiempo de reaccion. El complejo FlAsH/HhaCCPGCC se caracterizo mediante fluorescencia y se comprobo mediante MALDI TOF. La incorporacion HhaCCPGCC1/ FlAsH no se obtuvo en un alto porcentaje como se esperaba, por esta razon no se pudieron hacer los estudios de interaccion entre el complejo de proteinas Hha y H-NS