Is total RNA extraction possible from small volume goat milk (7.5 mL) for RT-qPCR studies?

Bu calismada kucuk hacimlerdeki sut orneklerinden total RNA izolasyonu yapilarak, RT-qPCR calismalarinin yapilabilirliginin arastirilmasi amaclanmistir. Bunun icin 7,5 mL sutten RNA izole edilmis; RNA miktari, kalitesi ve RT-qPCR’dan elde edilen Ct sonuclari 100 mL sutten elde edilen degerlerle karsilastirilmistir. Kullanilan butun orneklerde A260/A280 absorbans orani 1,70’ten buyuk, RNA safliginin ortalamasi 7,5 mL ornek grubunda 1,87±0,07, 100 mL ornek grubunda 1,77±0,01 olarak tespit edilmistir. Total RNA konsantrasyonunun ortalamasi 7,5 mL ornek grubunda 149,37±43,40 µg/mL iken, 100 mL ornek grubunda 309,03±77,82 µg/mL olarak olculmustur. Kullanilan 8 kecinin somatik hucre sayisinin (SCC) ortalamasi ise 486,37±185,68 x 103olarak hesaplanmistir. Elde edilen RNA’larin RT-qPCR’da kullanilabilirligini test etmek icin keci sut somatik hucrelerinde referans gen olarak kabul edilen Ribosomal Protein Lateral Stalk Subunit P0 (RPLP0) geni kullanilmistir. 7,5 mL grubunda Ct sonuclarinin ortalamasi 20,33±0,39, 100 mL grubunda 19,51±0,41 olarak bulunmus olup, iki grup arasinda bir fark olusmamistir (P=0,170). Elde edilen RNA’nin miktari, kalitesi ve Ct sonuclari 7,5 mL sut kullanilarak da RNA izolasyonu yapilabilecegini gostermistir