The Influence of the Host Cell and Trypsin Treatment on Bovine Coronavirus Infectivity

Summary We examined the effect of trypsin on the infectivity of bovine coronavirus strain L9 (BCV‐L9). Sets of cultures of human rectal tumor (HRT‐18) cells, four clones of HRT‐18 cells, and bovine fetal spleen (D2BFS) cells were infected in duplicate with serial dilutions of BCV‐L9. Infected cultures were propagated in trypsin‐containing or trypsin‐free medium, and virus yields were measured as plaque forming units (PFU) and hemagglutination (HA) titers. The effect of trypsin was assessed by comparing PFU:HA ratios obtained in the presence and absence of trypsin. Trypsin‐enhanced infectivity was evident in cultures of HRT‐18 parent cells, D2BFS cells, and 3 of the 4 HRT‐18 clones when the cultures were inoculated with high dilutions of virus. The degree of enhancement varied between the different cell cultures. The data indicate that trypsin modification influences BCV infectivity, but this effect depends on the host cell. The effect of different trypsin‐treatment conditions on the production of infectious virus was explored with D2BFS cells. Treatment of D2BFS cells with trypsin prior to infection had no effect on virus yield. The presence of trypsin in culture medium of infected cells resulted in significantly enhanced virus yields. Zusammenfassung Der Einfluß von Wirtszelle und Trypsinbehandlung auf die Infektiosität boviner Coronaviren Der Einfluß von Trypsin auf die Infektiosität des bovinen Coronavirusstammes L9 (BCV‐L9) wurde untersucht. Dazu wurden menschliche Rektaltumorzellen (HRT‐18), vier Zellklone der HRT‐18‐Zellen und bovine fötale Milzzellen (D2BFS) im Doppelansatz mit Verdünnungsreihen von BCV‐L9 infiziert. Infizierte Kulturen erhielten Medium mit oder ohne Trypsin, und die Virusernten wurden als Plaque‐bildende Einheiten (PBE) bzw. Hämagglutinationstiter (HA) gemessen. Der Einfluß von Trypsin wurde durch das in An‐ oder Abwesenheit von Trypsin erhaltene Verhältnis von PBE zu HA abgeschätzt. Eine Erhöhung der Infektiosität durch Trypsin wurde in HRT‐18‐ und D2BFS‐Zellen sowie in drei der vier Subklone von HRT‐18‐Zellen beobachtet, wenn die Kulturen mit hohen Verdünnungen von BCV infiziert worden waren. Der Grad der Erhöhung war jedoch bei den einzelnen Zellkulturen unterschiedlich. Die Daten weisen darauf hin, daß Trypsin die Infektiosität von BCV beeinflußt, wobei dieser Effekt aber von der Wirtszelle abhängt. Der Effekt unterschiedlicher Trypsin‐Behandlungsverfahren auf die Ausbeute an infektiösem BCV wurde in D2BFS‐Zellen untersucht. Trypsinbehandlung dieser Zellen vor der Infektion hatte keinen Einfluß auf die Virusausbeute. Die Gegenwart von Trypsin im Medium infizierter Zellen ergab dagegen signifikant höhere Ausbeuten an infektiösem Virus.